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- Xybio
- 上海
- P2012
- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_001163355.1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pSV40-Rhot1(983-2019bp)小鼠基因质粒
别称: NM_001163355.1
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：小鼠
基因类型：cDNA
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pSV40-Rhot1(983-2019bp)质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4051/pCMV-SPORT6-CXADR（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4052/pCMV-SPORT6-NFATC2IP（482-1260bp）人源基因质粒 |
| P4053/pCMV-SPORT6-SLC25A11人源基因质粒 |
| P4054/pCMV-SPORT6-MINA人源基因质粒 |
| P4055/pCMV-SPORT6-PRKACB人源基因质粒 |
| P4056/pCMV-SPORT6-FAM107A人源基因质粒 |
| P4057/pCMV-SPORT6-NOV（1点突变）人源基因质粒 |
| P4058/pCMV-SPORT6-AIMP2人源基因质粒 |
| P4059/pCMV-SPORT6-CYSTM1人源基因质粒 |
| P4060/pCMV-SPORT6-TMEM159（1点突变）人源基因质粒 |
| P4061/pCMV-SPORT6-MT3人源基因质粒 |
| P4062/pCMV-SPORT6-NIP7人源基因质粒 |
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文献和实验基糖苷类的新霉素和卡那霉素[20]，因为这些氨基糖苷类的抗生素在临床上很少使用，且无耳毒性、肾毒性等副作用，所以更为合适[19]。 3. 其他元件的考虑 设计、构建DNA疫苗和基因治疗质粒载体的策略已经十分明显，它除了必须包括一个能使质粒在大肠杆菌中维持、分裂的元件；一个能促使目的基因在机体内表达的元件和选择标记外，还包括其他一些调控元件，以促使转基因的表达和质粒的稳定[21]，这些元件包括真核启动子、终止子及其终止信号等，启动子是外源基因在动物细胞内获得表达的必要前提，常见的有CMVI/E、SV40
细胞系等，该细胞有一定自发转化倾向，一般在转染前一天接种细胞，接种密度为2×104 /cm2 ,用含10%胎牛血清的DMEM液，37℃、5%CO2 培养，待细胞占50～70%瓶底面积时，用于转染试验。 (3)DNA-磷酸钙沉淀物的制备 ①将供体细胞DNA和PSV2-neo质粒载体DNA用TE配制成40mg/L的DNA溶液，同时向供体细胞DNA液200μl中加入带基因neo质粒DNA液(20mg/L)220μl和2×HBS 250μl(PSV2-neo为1～2mg/L的使用量)。 ②取500μl上述
让肿瘤变「热」！宋尔卫院士团队Nat Immunol发文报道肿瘤免疫治疗新策略
ImmunologyRGS1 的表达受什么因素调控？为了进一步探索 CTL 和 Th1 细胞中 RGS1 上调的机制，作者构建了一系列包含 RGS1 上游 5'-侧翼序列连续截短的报告质粒，将其电转到人类 T 细胞系 Jurkat 中，并用植物血凝素（PHA）刺激活化细胞。作者观察到，从 RGS1 转录起始位点上游 -2000 bp 到 -200 bp 的序列缺失不会影响 PHA 诱导的荧光素酶表达，而删除到 -150 bp 则完全消除了 PHA 的诱导作用。先前的研究表明 IFNγ-STAT1 通路在 CTL
