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- Xybio
- 上海
- P4839
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_001014432BC000479;AKT; CWS6; PKB;
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pCDNA3.1-Myr-FALG-Akt1人源基因质粒
别称: NM_001014432BC000479;AKT; CWS6; PKB;
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：G418
荧光蛋白：
质粒简介
pCDNA3.1-Myr-FLAG-Akt1质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4959/pCMV-SPORT6-UBE3B人源基因质粒 |
| P3720/pCMV-SPORT6-SLC25A4人源基因质粒 |
| P3721/pCMV-SPORT6-GLOD4人源基因质粒 |
| P3722/pCMV-SPORT6-SSBP1人源基因质粒 |
| P3723/pCMV-SPORT6-ATAD2（1-2720bp）人源基因质粒 |
| P3724/pCMV-SPORT6-FAM129B人源基因质粒 |
| P3725/pCMV-SPORT6-VASH1人源基因质粒 |
| P3726/pCMV-SPORT6-ATF4人源基因质粒 |
| P3727/pCMV-SPORT6-IPO13（1同义突变1点突变）人源基因质粒 |
| P3728/pCMV-SPORT6-TMEFF2人源基因质粒 |
| P3729/pCMV-SPORT6-DOK5人源基因质粒 |
| P3730/pCMV-SPORT6-VIRMA（1842-5439bp1同义突变）人源基因质粒 |
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文献和实验表达载体的构建方法及步骤 一、载体的选择及如何阅读质粒图谱 目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素： （1）复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而 真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。 （2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如 Amp+ ,Kan+ （3）多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段 （4） P/E 启动子/增强
非病毒载体介导的基因治疗有许多优点，但就目前大多数表达体系而言普遍存在外源基因表达水平低而短暂等问题为了使外源基因稳定持续表达，必须对质粒DNA 进行改造。附着体质粒载体(episomal vector)可以使外源基因以附着体形式复制，分离到子代细胞，从而使基因高效持续表达，是种新型的非病毒表达载体 。 我们构建了以EB病毒(Epstein Barr virus，EBV)复制子(EBV replicon，EBVR)为基础的附着体质粒载体，并将报告基因增强型绿色
【求助】逆转录病毒、慢病毒载体与其他真核表达载体在稳定筛选时的区别？
roy_liu823 逆转录病毒和慢病毒载体经包装后可以得到携带外源基因的病毒，将病毒感染细胞后，外源基因可以整合到细胞基因组中，经过稳定的筛选后，就可以得到稳定表达外源基因的细胞。 而一些真核表达载体如pcDNA3.1经脂质体转染进细胞后，也可以整合到细胞基因组中，并经过G418的筛选后，也可以得到稳定表达外源基因的细胞。我就很困惑：这两者有什么区别？用逆转录病毒或慢病毒载体的优势在哪？如果我想得到能稳定表达某一基因的骨髓基质干细胞，是不是用pcDNA3
