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pLVML-3×FLAG-N6AMT1人源基因质粒

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  • Xybio
  • 上海
  • P1722
  • 2025年07月06日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 保存条件

      -20

    • 保质期

      2年

    • 英文名

      MTQ2;HEMK2;N6AMT;PRED28;C21orf127

    • 库存

      100

    • 供应商

      上海烜雅生物科技有限公司

    • 规格

      干粉/液体

    基本信息
    名称:pLVML-3×FLAG-N6AMT1人源基因质粒
    别称: MTQ2;HEMK2;N6AMT;PRED28;C21orf127
    启动子:CMV
    复制子: pUC
    终止子:  WPRE
    原核抗性: Amp
    筛选标记:Puro
    克隆菌株: DH5a
    培养条件: 37度

    质粒属性
    载体宿主:哺乳细胞
    载体用途:蛋白表达
    基因种属:
    基因类型:ORF
    原核抗性:Amp
    真核抗性:Puro
    荧光蛋白:

    质粒简介
     pLVML-3×FLAG-N6AMT1-IRES-Puro(NM_013240.5)是一个人源基因慢病毒哺乳细胞过表达质粒。

    质粒图谱
    产品细节图片1

    质粒序列
    LOCUS       Exported                8840 bp ds-DNA     circular SYN 13-DEC-2017
    DEFINITION  synthetic circular DNA
    FEATURES             Location/Qualifiers
         source          1..8840
                         /organism="synthetic DNA construct"
                         /mol_type="other DNA"
         LTR             1..634
                         /label=3' LTR
                         /note="3' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
         misc_feature    681..806
                         /label=HIV-1 Psi
                         /note="packaging signal of human immunodeficiency virus 
                         type 1"
         misc_feature    1303..1536
                         /label=RRE
                         /note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for 
                         Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the 
                         cytoplasm."
         misc_feature    2028..2143
                         /label=cPPT/CTS
                         /note="central polypurine tract and central termination 
                         sequence of HIV-1 (lacking the first T)"
         enhancer        2201..2504
                         /label=CMV enhancer
                         /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
         promoter        2505..2708
                         /label=CMV promoter
                         /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                         promoter"
         regulatory      2809..2814
                         /regulatory_class="other"
                         /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 
                         of translation (Kozak, 1987)"
         CDS             2818..2883
                         /codon_start=1
                         /product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
                         enterokinase cleavage site"
                         /label=3xFLAG
                         /translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
         CDS             2890..3534
                         /codon_start=1
                         /product="pLVML-3×FLAG-N6AMT1-IRES-Puro(NM_013240.5)"
                         /label=N6AMT1
                         /translation="MAGENFATPFHGHVGRGAFSDVYEPAEDTFLLLDALEAAAAELAG
                         VEICLEVGSGSGVVSAFLASMIGPQALYMCTDINPEAAACTLETARCNKVHIQPVITDL
                         VKGLLPRLTEKVDLLVFNPPYVVTPPQEVGSHGIEAAWAGGRNGREVMDRFFPLVPDLL
                         SPRGLFYLVTIKENNPEEILKIMKTKGLQGTTALSRQAGQETLSVLKFTKS"
         misc_feature    3543..4116
                         /label=IRES
                         /note="internal ribosome entry site (IRES) of the 
                         encephalomyocarditis virus (EMCV)"
         CDS             4149..4748
                         /codon_start=1
                         /gene="pac from Streptomyces alboniger"
                         /product="puromycin N-acetyltransferase"
                         /label=PuroR
                         /note="confers resistance to puromycin"
                         /translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
                         VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
                         AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
                         APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
         misc_feature    4762..5350
                         /label=WPRE
                         /note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional 
                         regulatory element"
         LTR             5557..6190
                         /label=3' LTR
                         /note="3' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
         rep_origin      complement(6720..7308)
                         /direction=LEFT
                         /label=ori
                         /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                         replication"
         CDS             complement(7479..8339)
                         /codon_start=1
                         /gene="bla"
                         /product="beta-lactamase"
                         /label=AmpR
                         /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                         related antibiotics"
                         /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                         ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                         PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                         EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                         LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                         LIKHW"
         promoter        complement(8340..8444)
                         /gene="bla"
                         /label=AmpR promoter
         polyA_signal    8492..8626
                         /label=SV40 poly(A) signal
                         /note="SV40 polyadenylation signal"
    ORIGIN
            1 tggaagggct aattcactcc caaagaagac aagatatcct tgatctgtgg atctaccaca
           61 cacaaggcta cttccctgat tagcagaact acacaccagg gccaggggtc agatatccac
          121 tgacctttgg atggtgctac aagctagtac cagttgagcc agataaggta gaagaggcca
          181 ataaaggaga gaacaccagc ttgttacacc ctgtgagcct gcatgggatg gatgacccgg
          241 agagagaagt gttagagtgg aggtttgaca gccgcctagc atttcatcac gtggcccgag
          301 agctgcatcc ggagtacttc aagaactgct gatatcgagc ttgctacaag ggactttccg
          361 ctggggactt tccagggagg cgtggcctgg gcgggactgg ggagtggcga gccctcagat
          421 cctgcatata agcagctgct ttttgcctgt actgggtctc tctggttaga ccagatctga
          481 gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta agcctcaata aagcttgcct
          541 tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact ctggtaacta gagatccctc
          601 agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg cccgaacagg gacttgaaag
          661 cgaaagggaa accagaggag ctctctcgac gcaggactcg gcttgctgaa gcgcgcacgg
          721 caagaggcga ggggcggcga ctggtgagta cgccaaaaat tttgactagc ggaggctaga
          781 aggagagaga tgggtgcgag agcgtcagta ttaagcgggg gagaattaga tcgcgatggg
          841 aaaaaattcg gttaaggcca gggggaaaga aaaaatataa attaaaacat atagtatggg
          901 caagcaggga gctagaacga ttcgcagtta atcctggcct gttagaaaca tcagaaggct
          961 gtagacaaat actgggacag ctacaaccat cccttcagac aggatcagaa gaacttagat
         1021 cattatataa tacagtagca accctctatt gtgtgcatca aaggatagag ataaaagaca
         1081 ccaaggaagc tttagacaag atagaggaag agcaaaacaa aagtaagacc accgcacagc
         1141 aagcggccgg ccgctgatct tcagacctgg aggaggagat atgagggaca attggagaag
         1201 tgaattatat aaatataaag tagtaaaaat tgaaccatta ggagtagcac ccaccaaggc
         1261 aaagagaaga gtggtgcaga gagaaaaaag agcagtggga ataggagctt tgttccttgg
         1321 gttcttggga gcagcaggaa gcactatggg cgcagcgtca atgacgctga cggtacaggc
         1381 cagacaatta ttgtctggta tagtgcagca gcagaacaat ttgctgaggg ctattgaggc
         1441 gcaacagcat ctgttgcaac tcacagtctg gggcatcaag cagctccagg caagaatcct
         1501 ggctgtggaa agatacctaa aggatcaaca gctcctgggg atttggggtt gctctggaaa
         1561 actcatttgc accactgctg tgccttggaa tgctagttgg agtaataaat ctctggaaca
         1621 gatttggaat cacacgacct ggatggagtg ggacagagaa attaacaatt acacaagctt
         1681 aatacactcc ttaattgaag aatcgcaaaa ccagcaagaa aagaatgaac aagaattatt
         1741 ggaattagat aaatgggcaa gtttgtggaa ttggtttaac ataacaaatt ggctgtggta
         1801 tataaaatta ttcataatga tagtaggagg cttggtaggt ttaagaatag tttttgctgt
         1861 actttctata gtgaatagag ttaggcaggg atattcacca ttatcgtttc agacccacct
         1921 cccaaccccg aggggacccg acaggcccga aggaatagaa gaagaaggtg gagagagaga
         1981 cagagacaga tccattcgat tagtgaacgg atctcgacgg tatcgccttt aaaagaaaag
         2041 gggggattgg ggggtacagt gcaggggaaa gaatagtaga cataatagca acagacatac
         2101 aaactaaaga attacaaaaa caaattacaa aaattcaaaa ttttcgggtt tattacaggg
         2161 acagcagaga tccagtttat cgataagctt gggagttccg cgttacataa cttacggtaa
         2221 atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg
         2281 ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca atgggtggag tatttacggt
         2341 aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg
         2401 tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta catgacctta tgggactttc
         2461 ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac catggtgatg cggttttggc
         2521 agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg atttccaagt ctccacccca
         2581 ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta
         2641 acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa
         2701 gcagagctcg tttagtgaac cgtcagatcg cctggagacg ccatccacgc tgttttgacc
         2761 tccatagaag acaccgactc tactagagga tctatttccg gtgaattcgc caccatggac
         2821 tacaaagacc atgacggtga ttataaagat catgacatcg actacaagga tgacgatgac
         2881 aagctcgaga tggcagggga gaacttcgct acgccgttcc acgggcacgt gggccgcggc
         2941 gccttcagcg acgtgtacga gcccgcggag gacacgtttc tgcttttgga cgcgctggag
         3001 gcagcggctg ccgaactggc aggagtggaa atatgcctgg aagtagggtc agggtctggt
         3061 gtagtatctg cattcctagc ctctatgata ggccctcagg ctttgtacat gtgcactgat
         3121 atcaaccctg aggcagcagc ttgtacccta gagacagcac gctgtaacaa agttcacatt
         3181 caaccagtta ttacagattt ggtcaaaggc ttgctaccaa gattgaccga aaaagttgat
         3241 cttctggtgt ttaatccccc ctatgtagtg actccacctc aagaggtagg aagtcacgga
         3301 atagaggcag cttgggctgg tggcagaaat ggtcgggaag tcatggacag gttttttccc
         3361 ctggttccag atctcctttc accaagagga ttattctatt tagttaccat taaagaaaac
         3421 aacccagaag aaattttgaa aataatgaag acaaaaggtc tgcaaggaac cactgcactt
         3481 tccagacaag caggccaaga aactctttca gtcctcaagt tcaccaagtc ttagggatcc
         3541 cgcccctctc cctccccccc ccctaacgtt actggccgaa gccgcttgga ataaggccgg
         3601 tgtgcgtttg tctatatgtt attttccacc atattgccgt cttttggcaa tgtgagggcc
         3661 cggaaacctg gccctgtctt cttgacgagc attcctaggg gtctttcccc tctcgccaaa
         3721 ggaatgcaag gtctgttgaa tgtcgtgaag gaagcagttc ctctggaagc ttcttgaaga
         3781 caaacaacgt ctgtagcgac cctttgcagg cagcggaacc ccccacctgg cgacaggtgc
         3841 ctctgcggcc aaaagccacg tgtataagat acacctgcaa aggcggcaca accccagtgc
         3901 cacgttgtga gttggatagt tgtggaaaga gtcaaatggc tctcctcaag cgtattcaac
         3961 aaggggctga aggatgccca gaaggtaccc cattgtatgg gatctgatct ggggcctcgg
         4021 tgcacatgct ttacatgtgt ttagtcgagg ttaaaaaaac gtctaggccc cccgaaccac
         4081 ggggacgtgg ttttcctttg aaaaacacga tgataagctt gccacaaccc acaaggagac
         4141 gaccttccat gaccgagtac aagcccacgg tgcgcctcgc cacccgcgac gacgtccccc
         4201 gggccgtacg caccctcgcc gccgcgttcg ccgactaccc cgccacgcgc cacaccgtcg
         4261 acccggaccg ccacatcgag cgggtcaccg agctgcaaga actcttcctc acgcgcgtcg
         4321 ggctcgacat cggcaaggtg tgggtcgcgg acgacggcgc cgcggtggcg gtctggacca
         4381 cgccggagag cgtcgaagcg ggggcggtgt tcgccgagat cggcccgcgc atggccgagt
         4441 tgagcggttc ccggctggcc gcgcagcaac agatggaagg cctcctggcg ccgcaccggc
         4501 ccaaggagcc cgcgtggttc ctggccaccg tcggcgtctc gcccgaccac cagggcaagg
         4561 gtctgggcag cgccgtcgtg ctccccggag tggaggcggc cgagcgcgcc ggggtgcccg
         4621 ccttcctgga gacctccgcg ccccgcaacc tccccttcta cgagcggctc ggcttcaccg
         4681 tcaccgccga cgtcgaggtg cccgaaggac cgcgcacctg gtgcatgacc cgcaagcccg
         4741 gtgcctagac gcgtctggaa caatcaacct ctggattaca aaatttgtga aagattgact
         4801 ggtattctta actatgttgc tccttttacg ctatgtggat acgctgcttt aatgcctttg
         4861 tatcatgcta ttgcttcccg tatggctttc attttctcct ccttgtataa atcctggttg
         4921 ctgtctcttt atgaggagtt gtggcccgtt gtcaggcaac gtggcgtggt gtgcactgtg
         4981 tttgctgacg caacccccac tggttggggc attgccacca cctgtcagct cctttccggg
         5041 actttcgctt tccccctccc tattgccacg gcggaactca tcgccgcctg ccttgcccgc
         5101 tgctggacag gggctcggct gttgggcact gacaattccg tggtgttgtc ggggaagctg
         5161 acgtcctttc catggctgct cgcctgtgtt gccacctgga ttctgcgcgg gacgtccttc
         5221 tgctacgtcc cttcggccct caatccagcg gaccttcctt cccgcggcct gctgccggct
         5281 ctgcggcctc ttccgcgtct tcgccttcgc cctcagacga gtcggatctc cctttgggcc
         5341 gcctccccgc ctggaattaa ttctgcagtc gagacctaga aaaacatgga gcaatcacaa
         5401 gtagcaatac agcagctacc aatgctgatt gtgcctggct agaagcacaa gaggaggagg
         5461 aggtgggttt tccagtcaca cctcaggtac ctttaagacc aatgacttac aaggcagctg
         5521 tagatcttag ccacttttta aaagaaaaga ggggactgga agggctaatt cactcccaac
         5581 gaagacaaga tatccttgat ctgtggatct accacacaca aggctacttc cctgattagc
         5641 agaactacac accagggcca ggggtcagat atccactgac ctttggatgg tgctacaagc
         5701 tagtaccagt tgagccagat aaggtagaag aggccaataa aggagagaac accagcttgt
         5761 tacaccctgt gagcctgcat gggatggatg acccggagag agaagtgtta gagtggaggt
         5821 ttgacagccg cctagcattt catcacgtgg cccgagagct gcatccggag tacttcaaga
         5881 actgctgata tcgagcttgc tacaagggac tttccgctgg ggactttcca gggaggcgtg
         5941 gcctgggcgg gactggggag tggcgagccc tcagatcctg catataagca gctgcttttt
         6001 gcctgtactg ggtctctctg gttagaccag atctgagcct gggagctctc tggctaacta
         6061 gggaacccac tgcttaagcc tcaataaagc ttgccttgag tgcttcaagt agtgtgtgcc
         6121 cgtctgttgt gtgactctgg taactagaga tccctcagac ccttttagtc agtgtggaaa
         6181 atctctagca gtagtagttc atgtcatctt attattcagt atttataact tgcaaagaaa
         6241 tgaatatcag agagtgagag gccttgacat tgctagcgtt taccgtcgac ctctagctag
         6301 agcttggcgt aatcatggtc atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc gctcacaatt
         6361 ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta atgagtgagc
         6421 taactcacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa cctgtcgtgc
         6481 cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct
         6541 tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca
         6601 gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac
         6661 atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt
         6721 ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg
         6781 cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc
         6841 tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc
         6901 gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc
         6961 aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac
         7021 tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt
         7081 aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct
         7141 aactacggct acactagaag aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc
         7201 ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt
         7261 ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg
         7321 atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc
         7381 atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa
         7441 tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag
         7501 gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg
         7561 tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga
         7621 gacccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag
         7681 cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa
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    质粒菌株产品操作说明书
    一、扩增流程
             收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
             1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
                  1100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
                  加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37培养45min
                  6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
                  将平板正向培养1h,再倒置37培养14h。如果要求是30度则培养20h
    (菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
                  挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
            2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
                  四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
            3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
            4、菌落平板(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  直接挑取单菌落至液体培养基中。
            5、液体质粒(冰袋运输,存于-20,保质期90天)
                  单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
            6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。

    二、转化图片
    产品细节图片2
    产品细节图片3
    P4370/pECMV-3×FLAG-RDH11人源基因质粒
    P4371/pECMV-3×FLAG-MPPED2人源基因质粒
    P4372/pECMV-3×FLAG-RRP8(1同义突变)人源基因质粒
    P4373/pECMV-3×FLAG-NAE1人源基因质粒
    P4374/pCDH-CMV-GLUT1-EF1-turboRFP-T2A-Puro人源基因质粒
    P4375/pECMV-3×FLAG-TMEM108人源基因质粒
    P4376/pECMV-3×FLAG-CALM2人源基因质粒
    P4377/pECMV-3×FLAG-TTC14人源基因质粒
    P4378/pCDNA3.0-HA-IGHG1人源基因质粒
    P4379/pCDNA3.1-3×HA-IKKI人源基因质粒
    P4380/pIRESpuro3-3×FLAG-RPL26人源基因质粒

     

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