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- 上海
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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#13816;SIR2L5
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：SIRT5 FLAG人源基因质粒
别称: Plasmid#138
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介：详询
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6351 bp ds-DNA circular SYN 26-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6351)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 26, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6351
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
rep_origin complement(234..822)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(993..1853)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(1854..1958)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
enhancer 2224..2603
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 2604..2807
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 2852..2870
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
misc_feature 2931..3860
/label=SIRT5
CDS 3873..3896
/codon_start=1
/product="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase
cleavage site"
/label=FLAG
/translation="DYKDDDDK"
polyA_signal 3937..4161
/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 4207..4635
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 4649..4978
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 4829..4964
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 5045..5839
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=Neo
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 6013..6134
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
ORIGIN
1 cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct
61 tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac
121 tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga
181 gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat
241 aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac
301 ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct
361 gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg
421 ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg
481 ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt
541 cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg
601 attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg gcctaactac
661 ggctacacta gaagaacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga
721 aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt
781 gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt
841 tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga
901 ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc
961 taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct
1021 atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt cgtgtagata
1081 actacgatac gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca
1141 cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga
1201 agtggtcctg caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg ggaagctaga
1261 gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac aggcatcgtg
1321 gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga
1381 gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt
1441 gtcagaagta agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact gcataattct
1501 cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca
1561 ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat acgggataat
1621 accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga
1681 aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc
1741 aactgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa aacaggaagg
1801 caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat gttgaatact catactcttc
1861 ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt
1921 gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca
1981 cctgacgtcg acggatcggg agatctcccg atcccctatg gtgcactctc agtacaatct
2041 gctctgatgc cgcatagtta agccagtatc tgctccctgc ttgtgtgttg gaggtcgctg
2101 agtagtgcgc gagcaaaatt taagctacaa caaggcaagg cttgaccgac aattgcatga
2161 agaatctgct tagggttagg cgttttgcgc tgcttcgcga tgtacgggcc agatatacgc
2221 gttgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata
2281 gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc
2341 ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag
2401 ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta aactgcccac ttggcagtac
2461 atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg
2521 cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg
2581 tattagtcat cgctattacc atggtgatgc ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat
2641 agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt
2701 tttggcacca aaatcaacgg gactttccaa aatgtcgtaa caactccgcc ccattgacgc
2761 aaatgggcgg taggcgtgta cggtgggagg tctatataag cagagctctc tggctaacta
2821 gagaacccac tgcttactgg cttatcgaaa ttaatacgac tcactatagg gagacccaag
2881 ctggctagcg tttaaactta agcttggtac cgagctcgga tccgaattcc atgcgacctc
2941 tccagattgt cccaagtcga ttgatttccc agctatattg tggcctgaag cctccagcgt
3001 ccacacgaaa ccagatttgc ctgaaaatgg ctcggccaag ttcaagtatg gcagattttc
3061 gaaagttttt tgcaaaagca aagcacatag tcatcatctc aggagctggt gttagtgcag
3121 aaagtggtgt tccgaccttc agaggagctg gaggttattg gagaaaatgg caagcccagg
3181 acctggcgac tcccctggcc tttgcccaca acccgtcccg ggtgtgggag ttctaccact
3241 accggcggga ggtcatgggg agcaaggagc ccaacgccgg gcaccgcgcc atagccgagt
3301 gtgagacccg gctgggcaag cagggccggc gagtcgtggt catcacccag aacatcgatg
3361 agctgcaccg caaggctggc accaagaacc ttctggagat ccatggtagc ttatttaaaa
3421 ctcgatgtac ctcttgtgga gttgtggctg agaattacaa gagtccaatt tgtccagctt
3481 tatcaggaaa aggtgctcca gaacctggaa ctcaagatgc cagcatccca gttgagaaac
3541 ttccccggtg tgaagaggca ggctgcgggg gcttgctgcg acctcacgtc gtgtggtttg
3601 gagaaaacct ggatcctgcc attctggagg aggttgacag agagctcgcc cactgtgatt
3661 tatgtctagt ggtgggcact tcctctgtgg tgtacccagc agccatgttt gccccccagg
3721 tggctgccag gggcgtgcca gtggctgaat ttaacacgga gaccacccca gctacgaaca
3781 gattcaggtt tcatttccag ggaccctgtg gaacgactct tcctgaagcc cttgcctgtc
3841 atgaaaatga aactgtttct gaattcggag gagactacaa ggacgacgat gacaagtaat
3901 ctagagggcc cgtttaaacc cgctgatcag cctcgactgt gccttctagt tgccagccat
3961 ctgttgtttg cccctccccc gtgccttcct tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc
4021 tttcctaata aaatgaggaa attgcatcgc attgtctgag taggtgtcat tctattctgg
4081 ggggtggggt ggggcaggac agcaaggggg aggattggga agacaatagc aggcatgctg
4141 gggatgcggt gggctctatg gcttctgagg cggaaagaac cagctggggc tctagggggt
4201 atccccacgc gccctgtagc ggcgcattaa gcgcggcggg tgtggtggtt acgcgcagcg
4261 tgaccgctac acttgccagc gccctagcgc ccgctccttt cgctttcttc ccttcctttc
4321 tcgccacgtt cgccggcttt ccccgtcaag ctctaaatcg ggggctccct ttagggttcc
4381 gatttagtgc tttacggcac ctcgacccca aaaaacttga ttagggtgat ggttcacgta
4441 gtgggccatc gccctgatag acggtttttc gccctttgac gttggagtcc acgttcttta
4501 atagtggact cttgttccaa actggaacaa cactcaaccc tatctcggtc tattcttttg
4561 atttataagg gattttgccg atttcggcct attggttaaa aaatgagctg atttaacaaa
4621 aatttaacgc gaattaattc tgtggaatgt gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg
4681 ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg
4741 aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc
4801 aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat cccgccccta actccgccca gttccgccca
4861 ttctccgccc catggctgac taattttttt tatttatgca gaggccgagg ccgcctctgc
4921 ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaaa
4981 gctcccggga gcttgtatat ccattttcgg atctgatcaa gagacaggat gaggatcgtt
5041 tcgcatgatt gaacaagatg gattgcacgc aggttctccg gccgcttggg tggagaggct
5101 attcggctat gactgggcac aacagacaat cggctgctct gatgccgccg tgttccggct
5161 gtcagcgcag gggcgcccgg ttctttttgt caagaccgac ctgtccggtg ccctgaatga
5221 actgcaggac gaggcagcgc ggctatcgtg gctggccacg acgggcgttc cttgcgcagc
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5401 aatgcggcgg ctgcatacgc ttgatccggc tacctgccca ttcgaccacc aagcgaaaca
5461 tcgcatcgag cgagcacgta ctcggatgga agccggtctt gtcgatcagg atgatctgga
5521 cgaagagcat caggggctcg cgccagccga actgttcgcc aggctcaagg cgcgcatgcc
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5641 aaatggccgc ttttctggat tcatcgactg tggccggctg ggtgtggcgg accgctatca
5701 ggacatagcg ttggctaccc gtgatattgc tgaagagctt ggcggcgaat gggctgaccg
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5821 tcttgacgag ttcttctgag cgggactctg gggttcgaaa tgaccgacca agcgacgccc
5881 aacctgccat cacgagattt cgattccacc gccgccttct atgaaaggtt gggcttcgga
5941 atcgttttcc gggacgccgg ctggatgatc ctccagcgcg gggatctcat gctggagttc
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6061 acaaatttca caaataaagc atttttttca ctgcattcta gttgtggttt gtccaaactc
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6181 tggtcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca caattccaca caacatacga
6241 gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag tgagctaact cacattaatt
6301 gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct g
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：SIRT5 FLAG人源基因质粒
别称: Plasmid#138
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介：详询
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6351 bp ds-DNA circular SYN 26-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6351)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 26, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6351
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EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
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LIKHW"
promoter complement(1854..1958)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
enhancer 2224..2603
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
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/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 2852..2870
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
misc_feature 2931..3860
/label=SIRT5
CDS 3873..3896
/codon_start=1
/product="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase
cleavage site"
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/translation="DYKDDDDK"
polyA_signal 3937..4161
/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 4207..4635
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 4649..4978
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
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/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 5045..5839
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
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/label=Neo
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
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ORIGIN
1 cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct
61 tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac
121 tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga
181 gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat
241 aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac
301 ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct
361 gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg
421 ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg
481 ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt
541 cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg
601 attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg gcctaactac
661 ggctacacta gaagaacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga
721 aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt
781 gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt
841 tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga
901 ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc
961 taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct
1021 atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt cgtgtagata
1081 actacgatac gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca
1141 cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga
1201 agtggtcctg caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg ggaagctaga
1261 gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac aggcatcgtg
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1381 gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt
1441 gtcagaagta agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact gcataattct
1501 cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca
1561 ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat acgggataat
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1801 caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat gttgaatact catactcttc
1861 ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt
1921 gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca
1981 cctgacgtcg acggatcggg agatctcccg atcccctatg gtgcactctc agtacaatct
2041 gctctgatgc cgcatagtta agccagtatc tgctccctgc ttgtgtgttg gaggtcgctg
2101 agtagtgcgc gagcaaaatt taagctacaa caaggcaagg cttgaccgac aattgcatga
2161 agaatctgct tagggttagg cgttttgcgc tgcttcgcga tgtacgggcc agatatacgc
2221 gttgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata
2281 gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc
2341 ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag
2401 ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta aactgcccac ttggcagtac
2461 atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg
2521 cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg
2581 tattagtcat cgctattacc atggtgatgc ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat
2641 agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt
2701 tttggcacca aaatcaacgg gactttccaa aatgtcgtaa caactccgcc ccattgacgc
2761 aaatgggcgg taggcgtgta cggtgggagg tctatataag cagagctctc tggctaacta
2821 gagaacccac tgcttactgg cttatcgaaa ttaatacgac tcactatagg gagacccaag
2881 ctggctagcg tttaaactta agcttggtac cgagctcgga tccgaattcc atgcgacctc
2941 tccagattgt cccaagtcga ttgatttccc agctatattg tggcctgaag cctccagcgt
3001 ccacacgaaa ccagatttgc ctgaaaatgg ctcggccaag ttcaagtatg gcagattttc
3061 gaaagttttt tgcaaaagca aagcacatag tcatcatctc aggagctggt gttagtgcag
3121 aaagtggtgt tccgaccttc agaggagctg gaggttattg gagaaaatgg caagcccagg
3181 acctggcgac tcccctggcc tttgcccaca acccgtcccg ggtgtgggag ttctaccact
3241 accggcggga ggtcatgggg agcaaggagc ccaacgccgg gcaccgcgcc atagccgagt
3301 gtgagacccg gctgggcaag cagggccggc gagtcgtggt catcacccag aacatcgatg
3361 agctgcaccg caaggctggc accaagaacc ttctggagat ccatggtagc ttatttaaaa
3421 ctcgatgtac ctcttgtgga gttgtggctg agaattacaa gagtccaatt tgtccagctt
3481 tatcaggaaa aggtgctcca gaacctggaa ctcaagatgc cagcatccca gttgagaaac
3541 ttccccggtg tgaagaggca ggctgcgggg gcttgctgcg acctcacgtc gtgtggtttg
3601 gagaaaacct ggatcctgcc attctggagg aggttgacag agagctcgcc cactgtgatt
3661 tatgtctagt ggtgggcact tcctctgtgg tgtacccagc agccatgttt gccccccagg
3721 tggctgccag gggcgtgcca gtggctgaat ttaacacgga gaccacccca gctacgaaca
3781 gattcaggtt tcatttccag ggaccctgtg gaacgactct tcctgaagcc cttgcctgtc
3841 atgaaaatga aactgtttct gaattcggag gagactacaa ggacgacgat gacaagtaat
3901 ctagagggcc cgtttaaacc cgctgatcag cctcgactgt gccttctagt tgccagccat
3961 ctgttgtttg cccctccccc gtgccttcct tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc
4021 tttcctaata aaatgaggaa attgcatcgc attgtctgag taggtgtcat tctattctgg
4081 ggggtggggt ggggcaggac agcaaggggg aggattggga agacaatagc aggcatgctg
4141 gggatgcggt gggctctatg gcttctgagg cggaaagaac cagctggggc tctagggggt
4201 atccccacgc gccctgtagc ggcgcattaa gcgcggcggg tgtggtggtt acgcgcagcg
4261 tgaccgctac acttgccagc gccctagcgc ccgctccttt cgctttcttc ccttcctttc
4321 tcgccacgtt cgccggcttt ccccgtcaag ctctaaatcg ggggctccct ttagggttcc
4381 gatttagtgc tttacggcac ctcgacccca aaaaacttga ttagggtgat ggttcacgta
4441 gtgggccatc gccctgatag acggtttttc gccctttgac gttggagtcc acgttcttta
4501 atagtggact cttgttccaa actggaacaa cactcaaccc tatctcggtc tattcttttg
4561 atttataagg gattttgccg atttcggcct attggttaaa aaatgagctg atttaacaaa
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4801 aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat cccgccccta actccgccca gttccgccca
4861 ttctccgccc catggctgac taattttttt tatttatgca gaggccgagg ccgcctctgc
4921 ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaaa
4981 gctcccggga gcttgtatat ccattttcgg atctgatcaa gagacaggat gaggatcgtt
5041 tcgcatgatt gaacaagatg gattgcacgc aggttctccg gccgcttggg tggagaggct
5101 attcggctat gactgggcac aacagacaat cggctgctct gatgccgccg tgttccggct
5161 gtcagcgcag gggcgcccgg ttctttttgt caagaccgac ctgtccggtg ccctgaatga
5221 actgcaggac gaggcagcgc ggctatcgtg gctggccacg acgggcgttc cttgcgcagc
5281 tgtgctcgac gttgtcactg aagcgggaag ggactggctg ctattgggcg aagtgccggg
5341 gcaggatctc ctgtcatctc accttgctcc tgccgagaaa gtatccatca tggctgatgc
5401 aatgcggcgg ctgcatacgc ttgatccggc tacctgccca ttcgaccacc aagcgaaaca
5461 tcgcatcgag cgagcacgta ctcggatgga agccggtctt gtcgatcagg atgatctgga
5521 cgaagagcat caggggctcg cgccagccga actgttcgcc aggctcaagg cgcgcatgcc
5581 cgacggcgag gatctcgtcg tgacccatgg cgatgcctgc ttgccgaata tcatggtgga
5641 aaatggccgc ttttctggat tcatcgactg tggccggctg ggtgtggcgg accgctatca
5701 ggacatagcg ttggctaccc gtgatattgc tgaagagctt ggcggcgaat gggctgaccg
5761 cttcctcgtg ctttacggta tcgccgctcc cgattcgcag cgcatcgcct tctatcgcct
5821 tcttgacgag ttcttctgag cgggactctg gggttcgaaa tgaccgacca agcgacgccc
5881 aacctgccat cacgagattt cgattccacc gccgccttct atgaaaggtt gggcttcgga
5941 atcgttttcc gggacgccgg ctggatgatc ctccagcgcg gggatctcat gctggagttc
6001 ttcgcccacc ccaacttgtt tattgcagct tataatggtt acaaataaag caatagcatc
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6241 gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag tgagctaact cacattaatt
6301 gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct g
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1024/pCDNA3.1-MAPK14-6×His人源基因质粒 |
| P0782/pCDH-CMV-IDH1人源基因质粒 |
| P0785/pIRES2-EGFP-BMP2人源基因质粒 |
| P0892/p3×FLAG-SUMO1人源基因质粒 |
| P0893/p3×FLAG-SUMO2人源基因质粒 |
| P0894/p3×FLAG-SUMO3-A99V人源基因质粒 |
| P0603/pEF1α-2×FLAG-MDA5人源基因质粒 |
| P0622/pCMV6-XL4-SGLT2人源基因质粒 |
| P0529/pEGFP-IL13人源基因质粒 |
| P0530/pEGFP-TNF人源基因质粒 |
| P0532/pEGFP-IL4人源基因质粒 |
| P0594/pEGFP-IL6人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
liuruya 问别人要了个带GFP-tag（GFP-N2载体）的质粒，目的基因1.4kb，分子量约52kD，转染293T细胞能见荧光，WB杂不出来，设置了阴性和阳性对照证实不是WB的技术问题。后来又换了个flag-tag，仍然杂不出来WB。仔细检查过序列，不存在移码的问题，非常费解。有同学分析是空间位阻问题，不知换个tag是不是能解决这个问题。有同学遇到过这种问题么，或者帮忙分析一下可能的原因。谢谢！！！ zhuqueleee
shinesnowing 想构建一个能通过接合作用进入野生型弧菌并在其中表达外源基因的质粒，现在找到一个名为pBOR8的质粒，只有质粒简图，没找到全序列，质粒上的元件为ori R6K、mob RP4、Ap、lacIq，如下图: 现有两个问题想请教各位高人 （1）该质粒能否直接作为表达载体，将外源基因克隆到该质粒上，如果可以通常外源基因应该克隆到哪个位点？ （2）如果不能直接进行外源基因克隆和表达，那么应该
分，一是未稳定整合的，一是稳定整合的，所以开始时亮度要高。 2.为什么筛选后单克隆无荧光：首先，经过G418筛选，外源质粒不能整合入染色体的细胞死亡；其次，稳定整合的细胞外源质粒整合的位置存在位置效应，即整合于不利于外源基因表达的位置，从而使外源基因沉默；第三，我不知道你的质粒中是否加入了核糖体进入位点序列，如果有的话，研究显示该位点前后的基因表达水平存在不同，可以查查相关文献 3.有无好的办法：我认为没有，稳定转染筛选时有运气的成分，假如外源质粒恰好整合到了利于表达的染色体部位，这时筛
SIRT5 FLAG人源基因质粒
￥100 - 1000
