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- 上海
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- 2026年01月21日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
MAPRE3;RP3;EBF3;EBF3-S
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCS2-EGFP-EB3人源基因质粒
别称: MAPRE3;RP3;EBF3;EBF3-S
启动子：CMV
复制子: pUC
质粒大小：6630bp
质粒标签：N-HA
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：绿色
质粒简介
pCS2-EGFP-EB3质粒是一个人源基因过表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5634 bp ds-DNA circular SYN 11-OCT-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pCS2-EGFP-EB3
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5634)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5634
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 38..1022
/note="CMV IE94 promoter"
/note="enhancer/promoter region of simian cytomegalovirus
major immediate early transcription unit IE94"
promoter 1057..1075
/note="SP6 promoter"
/note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
CDS 1107..1823
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/note="EGFP"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
CDS 1830..2675
/codon_start=1
/note="EB3"
/translation="MAVNVYSTSVTSENLSRHDMLAWVNDSLHLNYTKIEQLCSGAAYC
QFMDMLFPGCVHLRKVKFQAKLEHEYIHNFKVLQAAFKKMGVDKIIPVEKLVKGKFQDN
FEFIQWFKKFFDANYDGKDYNPLLARQGQDVAPPPNPGDQIFNKSKKLIGTAVPQRTSP
TGPKNMQTSGRLSNVAPPCILRKNPPSARNGGHEADAQILELNQQLLDLKLTVDGLEKE
RDFYFSKLRDIELICQEHESENSPVISGIIGILYATEEGFAPPEDDEIEEHQQEDQDEY
"
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/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(3393..3981)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4152..5012)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(5013..5117)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
rep_origin complement(5143..5598)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 ggcgatcggt gcgggcctct tcgctattac gccagtcgac catagccaat tcaatatggc
61 gtatatggac tcatgccaat tcaatatggt ggatctggac ctgtgccaat tcaatatggc
121 gtatatggac tcgtgccaat tcaatatggt ggatctggac cccagccaat tcaatatggc
181 ggacttggca ccatgccaat tcaatatggc ggacttggca ctgtgccaac tggggagggg
241 tctacttggc acggtgccaa gtttgaggag gggtcttggc cctgtgccaa gtccgccata
301 ttgaattggc atggtgccaa taatggcggc catattggct atatgccagg atcaatatat
361 aggcaatatc caatatggcc ctatgccaat atggctattg gccaggttca atactatgta
421 ttggccctat gccatatagt attccatata tgggttttcc tattgacgta gatagcccct
481 cccaatgggc ggtcccatat accatatatg gggcttccta ataccgccca tagccactcc
541 cccattgacg tcaatggtct ctatatatgg tctttcctat tgacgtcata tgggcggtcc
601 tattgacgta tatggcgcct cccccattga cgtcaattac ggtaaatggc ccgcctggct
661 caatgcccat tgacgtcaat aggaccaccc accattgacg tcaatgggat ggctcattgc
721 ccattcatat ccgttctcac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccacttgg
781 cagtacatca atatctatta atagtaactt ggcaagtaca ttactattgg aaggacgcca
841 gggtacattg gcagtactcc cattgacgtc aatggcggta aatggcccgc gatggctgcc
901 aagtacatcc ccattgacgt caatggggag gggcaatgac gcaaatgggc gttccattga
961 cgtaaatggg cggtaggcgt gcctaatggg aggtctatat aagcaatgct cgtttaggga
1021 accgccattc tgcctgggga cgtcggagca agcttgattt aggtgacact atagaataca
1081 agctacttgt tctttttgca ggatccatgg tgagcaaggg cgaggagctg ttcaccgggg
1141 tggtgcccat cctggtcgag ctggacggcg acgtaaacgg ccacaagttc agcgtgtccg
1201 gcgagggcga gggcgatgcc acctacggca agctgaccct gaagttcatc tgcaccaccg
1261 gcaagctgcc cgtgccctgg cccaccctcg tgaccaccct gacctacggc gtgcagtgct
1321 tcagccgcta ccccgaccac atgaagcagc acgacttctt caagtccgcc atgcccgaag
1381 gctacgtcca ggagcgcacc atcttcttca aggacgacgg caactacaag acccgcgccg
1441 aggtgaagtt cgagggcgac accctggtga accgcatcga gctgaagggc atcgacttca
1501 aggaggacgg caacatcctg gggcacaagc tggagtacaa ctacaacagc cacaacgtct
1561 atatcatggc cgacaagcag aagaacggca tcaaggtgaa cttcaagatc cgccacaaca
1621 tcgaggacgg cagcgtgcag ctcgccgacc actaccagca gaacaccccc atcggcgacg
1681 gccccgtgct gctgcccgac aaccactacc tgagcaccca gtccgccctg agcaaagacc
1741 ccaacgagaa gcgcgatcac atggtcctgc tggagttcgt gaccgccgcc gggatcactc
1801 tcggcatgga cgagctgtac aaggaattca tggctgtcaa tgtgtactcc acttctgtga
1861 ccagtgagaa tctgagtcgc catgatatgc ttgcatgggt caatgactct ctgcacctca
1921 attataccaa gattgaacag ctctgttcag gggcagccta ctgccagttc atggacatgc
1981 tcttccctgg ctgtgttcac ttgaggaagg tcaagttcca ggccaaacta gaacacgagt
2041 acatccacaa cttcaaggtg ctgcaagcag ctttcaagaa gatgggtgtt gacaaaatca
2101 ttcccgtaga gaagttagtg aaaggaaaat tccaagataa ttttgagttt atacagtggt
2161 ttaagaaatt ctttgacgca aactatgatg gaaaggatta caaccctctg ctggcgcggc
2221 agggccagga cgtagcacca cctcctaacc caggtgatca gatcttcaac aaatccaaga
2281 aactcattgg cacagcagtt ccgcagagga cgtcccccac aggccccaag aacatgcaga
2341 cctctggacg actcagcaac gtggctccgc cctgcatcct ccggaagaat cccccctcag
2401 cccgaaacgg tggccatgag gctgacgccc agatcctcga gcttaaccag cagctgctgg
2461 acttgaagct gaccgtagac gggcttgaga aagaacgaga tttctatttc agcaaattgc
2521 gagacatcga gctgatctgc caggaacatg agagcgagaa cagccccgtc atctcgggca
2581 tcattggcat tctctatgcc acggaggagg gatttgcacc ccctgaggat gatgagattg
2641 aagaacacca acaggaagac caggacgagt actgatctag aactatagtg agtcgtatta
2701 cgtagatcca gacatgataa gatacattga tgagtttgga caaaccacaa ctagaatgca
2761 gtgaaaaaaa tgctttattt gtgaaatttg tgatgctatt gctttatttg taaccattat
2821 aagctgcaat aaacaagtta acaacaacaa ttgcattcat tttatgtttc aggttcaggg
2881 ggaggtgtgg gaggtttttt aattcgcggc cgcggcgcca atgcattggg cccggtaccc
2941 agcttttgtt ccctttagtg agggttaatt gcgcgcttgg cgtaatcatg gtcatagctg
3001 tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc cggaagcata
3061 aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc gttgcgctca
3121 ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat cggccaacgc
3181 gcggggagag gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg
3241 cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt aatacggtta
3301 tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc
3361 aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc ccctgacgag
3421 catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac
3481 caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc
3541 ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt
3601 aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc
3661 gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga
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3781 ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag aaggacagta
3841 tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg tagctcttga
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3961 cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag
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//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCS2-EGFP-EB3人源基因质粒
别称: MAPRE3;RP3;EBF3;EBF3-S
启动子：CMV
复制子: pUC
质粒大小：6630bp
质粒标签：N-HA
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：绿色
质粒简介
pCS2-EGFP-EB3质粒是一个人源基因过表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5634 bp ds-DNA circular SYN 11-OCT-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pCS2-EGFP-EB3
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5634)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
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PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
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promoter complement(5013..5117)
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/note="AmpR promoter"
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ORIGIN
1 ggcgatcggt gcgggcctct tcgctattac gccagtcgac catagccaat tcaatatggc
61 gtatatggac tcatgccaat tcaatatggt ggatctggac ctgtgccaat tcaatatggc
121 gtatatggac tcgtgccaat tcaatatggt ggatctggac cccagccaat tcaatatggc
181 ggacttggca ccatgccaat tcaatatggc ggacttggca ctgtgccaac tggggagggg
241 tctacttggc acggtgccaa gtttgaggag gggtcttggc cctgtgccaa gtccgccata
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361 aggcaatatc caatatggcc ctatgccaat atggctattg gccaggttca atactatgta
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601 tattgacgta tatggcgcct cccccattga cgtcaattac ggtaaatggc ccgcctggct
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2341 cctctggacg actcagcaac gtggctccgc cctgcatcct ccggaagaat cccccctcag
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2461 acttgaagct gaccgtagac gggcttgaga aagaacgaga tttctatttc agcaaattgc
2521 gagacatcga gctgatctgc caggaacatg agagcgagaa cagccccgtc atctcgggca
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2641 aagaacacca acaggaagac caggacgagt actgatctag aactatagtg agtcgtatta
2701 cgtagatcca gacatgataa gatacattga tgagtttgga caaaccacaa ctagaatgca
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3241 cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt aatacggtta
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4561 tgcaaaaaag cggttagctc cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca
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5521 gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg
5581 cgccgctaca gggcgcgtcc cattcgccat tcaggctgcg caactgttgg gaag
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2287/pMSCV-FLIP-puro-dsRed-GFP-miRNA小鼠调控质粒 |
| P1272/pSP73-Ragrp-m小鼠调控质粒 |
| P1701/2C::tdTomato Reporter小鼠启动子质粒 |
| P1015/pLVX-aMHC-eGFP-Rex-Neo小鼠启动子质粒 |
| P1062/paMHC-Puro-Rex-Blast小鼠启动子质粒 |
| P4521/pALB-GFP小鼠启动子质粒 |
| P0636/Angptl4-r大鼠基因质粒 |
| P2761/pGEM-Pecam1-r大鼠基因质粒 |
| P0931/pUC57-Tac-mCherry-HS-TNFα-r大鼠基因质粒 |
| P0642/pExpress-Beclin1-r大鼠基因质粒 |
| P1090/CaV1.3e[8a1131bΔ3242a] mut大鼠基因质粒 |
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文献和实验相关实验
一、实验目的 学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。 二、实验原理 上图所示是脂质体介导转染的示意图，它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。 外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入
plenti-CMV-EGFP-LC3 质粒 plenti-CMV-mRFP-EGFP-LC3 质粒 2. LC3 细胞自噬病毒 plenti-CMV-EGFP-LC3慢病毒 plenti-CMV-mRFP-EGFP-LC3 慢病毒 plenti-CMV-EGFP-LC3 腺病毒 plenti-CMV-mRFP-EGFP-LC3 腺病毒 文献支持（部分） 1. Autophagy 10:10, 1-13; October 2014 Endoplasmic
非病毒载体介导的基因治疗有许多优点，但就目前大多数表达体系而言普遍存在外源基因表达水平低而短暂等问题为了使外源基因稳定持续表达，必须对质粒DNA 进行改造。附着体质粒载体(episomal vector)可以使外源基因以附着体形式复制，分离到子代细胞，从而使基因高效持续表达，是种新型的非病毒表达载体 。 我们构建了以EB病毒(Epstein Barr virus，EBV)复制子(EBV replicon，EBVR)为基础的附着体质粒载体，并将报告基因增强型绿色
pCS2-EGFP-EB3人源基因质粒
￥100 - 1000
