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- Xybio
- 上海
- P0553
- 2025年07月16日
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- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_198282.3;ERISMITAMPYSNET23SAVISTI
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pEGFP-C3-STING人源基因质粒
别称: NM_198282.3;ERISMITAMPYSNET23SAVISTI
启动子：CMV
复制子: pUC
质粒分类：基因文库质粒
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：绿色
质粒简介：详询
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3772/pECMV-3×FLAG-CSTB人源基因质粒 |
| P3773/pECMV-3×FLAG-TMEM109人源基因质粒 |
| P3774/pECMV-3×FLAG-ZNF76(2同义突变）人源基因质粒 |
| P3775/pECMV-3×FLAG-SRP54（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3776/pECMV-3×FLAG-OAT（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3777/pECMV-3×FLAG-VGLL1人源基因质粒 |
| P3778/pECMV-3×FLAG-ARF4人源基因质粒 |
| P3779/pECMV-3×FLAG-MMADHC(1同义突变）人源基因质粒 |
| P3780/pECMV-3×FLAG-RPL10人源基因质粒 |
| P3781/pECMV-3×FLAG-SLC12A9(1同义突变）人源基因质粒 |
| P3782/pECMV-3×FLAG-GP-CPD1人源基因质粒 |
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文献和实验问：手上有U251细胞，pEGFP载体，现在将不带外源基因的载体转u251的效率都很低，10%都没有。所用转染试剂：invitrogen的Lipofectamine 2000和威格拉斯的Vigofect，效率都很低，试过不同细胞密度，不同的DNA和转染试剂的比值，还是不行。各位高人有没有什么建议，另外转染的时候使用有血清的培养基养细胞，不知道影响大不大（说明书上说没有影响），稀释DNA和转染试剂是无血清的培养基，还有就是细胞是很久以前的了，传代较多不知道行不行。答：lipo最好
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Pastris3种。以Pichia Pastoris应用最多。 甲醇酵母的表达载体为整合型质粒，载体中含有与酵母染色体中同源的序列，因而比较容易整合入酵母染色体中。大部分甲醇酵母的表达载体中都含有甲醇酵母醇氧化酶基因一1(A0x1)，在该基因的启动子(PAXOI)作用下，外源基因得以表达。PAXOI是一个强启动子，在以葡萄糖或甘油为碳源时。甲醇酵母中AOx1基因的表达受到抑制，而在以甲醇为唯一碳源时PAXOI可被诱导激活，因而外源基因可在其控制下表达,将目的基因多拷贝整合入酵母染色体后可以提高
