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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
D3DR;ETM1;FET1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pT7-His-DRD3人源基因质粒
别称: D3DR;ETM1;FET1
复制子: pBR322
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pT7-His-DRD3是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6511 bp ds-DNA circular SYN 24-八月-2017
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6511
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 141..159
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 160..184
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
misc_feature 199..221
/note="RBS"
CDS 240..257
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
CDS 303..1505
/codon_start=1
/note="DRD3"
/translation="MASLSQLSGHLNYTCGAENSTGASQARPHAYYALSYCALILAIVF
GNGLVCMAVLKERALQTTTNYLVVSLAVADLLVATLVMPWVVYLEVTGGVWNFSRICCD
VFVTLDVMMCTASILNLCAISIDRYTAVVMPVHYQHGTGQSSCRRVALMITAVWVLAFA
VSCPLLFGFNTTGDPTVCSISNPDFVIYSSVVSFYLPFGVTVLVYARIYVVLKQRRRKR
ILTRQNSQCNSVRPGFPQQTLSPDPAHLELKRYYSICQDTALGGPGFQERGGELKREEK
TRNSLSPTIAPKLSLEVRKLSNGRLSTSLKLGPLQPRGVPLREKKATQMVAIVLGAFIV
CWLPFFLTHVLNTHCQTCHVSPELYSATTWLGYVNSALNPVIYTTFNIEFRKAFLKILS
C"
CDS 1512..1529
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
terminator 1596..1643
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
rep_origin 1680..2135
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
CDS complement(2228..3043)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
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/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4183..4374)
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
CDS complement(5183..6265)
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
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ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(6266..6343)
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
ORIGIN
1 tcatgagccc gaagtggcga gcccgatctt ccccatcggt gatgtcggcg atataggcgc
61 cagcaaccgc acctgtggcg ccggtgatgc cggccacgat gcgtccggcg tagaggatcg
121 agatctcgat cccgcgaaat taatacgact cactataggg gaattgtgag cggataacaa
181 ttcccctcta gaaataattt tgtttaactt taagaaggag atataccatg ggcagcagcc
241 atcatcatca tcatcacagc agcggccgcg gatccgaatt cgagctccgt cgacaagctt
301 gcatggcatc tctgagccag ctgagtggcc acctgaacta cacctgtggg gcagagaact
361 ccacaggtgc cagccaggcc cgcccacatg cctactatgc cctctcctac tgcgcgctca
421 tcctggccat cgtcttcggc aatggcctgg tgtgcatggc tgtgctgaag gagcgggccc
481 tgcagactac caccaactac ttagtagtga gcctggctgt ggcagacttg ctggtggcca
541 ccttggtgat gccctgggtg gtatacctgg aggtgacagg tggagtctgg aatttcagcc
601 gcatttgctg tgatgttttt gtcaccctgg atgtcatgat gtgtacagcc agcatcctta
661 atctctgtgc catcagcata gacaggtaca ctgcagtggt catgcccgtt cactaccagc
721 atggcacggg acagagctcc tgtcggcgcg tggccctcat gatcacggcc gtctgggtac
781 tggcctttgc tgtgtcctgc cctcttctgt ttggctttaa taccacaggg gaccccactg
841 tctgctccat ctccaaccct gattttgtca tctactcttc agtggtgtcc ttctacctgc
901 cctttggagt gactgtcctt gtctatgcca gaatctatgt ggtgctgaaa caaaggagac
961 ggaaaaggat cctcactcga cagaacagtc agtgcaacag tgtcaggcct ggcttccccc
1021 aacaaaccct ctctcctgac ccggcacatc tggagctgaa gcgttactac agcatctgcc
1081 aggacactgc cttgggtgga ccaggcttcc aagaaagagg aggagagttg aaaagagagg
1141 agaagactcg gaattccctg agtcccacca tagcgcccaa gctcagctta gaagttcgaa
1201 aactcagcaa tggcagatta tcgacatctt tgaagctggg gcccctgcaa cctcggggag
1261 tgccacttcg ggagaagaag gcaacccaaa tggtggccat tgtgcttggg gccttcattg
1321 tctgctggct gcccttcttc ttgacccatg ttctcaatac ccactgccag acatgccacg
1381 tgtccccaga gctttacagt gccacgacat ggctgggcta cgtgaatagc gccctcaacc
1441 ctgtgatcta taccaccttc aatatcgagt tccggaaagc cttcctcaag atcctgtctt
1501 gctgactcga gcaccaccac caccaccact gagatccggc tgctaacaaa gcccgaaagg
1561 aagctgagtt ggctgctgcc accgctgagc aataactagc ataacccctt ggggcctcta
1621 aacgggtctt gaggggtttt ttgctgaaag gaggaactat atccggattg gcgaatggga
1681 cgcgccctgt agcggcgcat taagcgcggc gggtgtggtg gttacgcgca gcgtgaccgc
1741 tacacttgcc agcgccctag cgcccgctcc tttcgctttc ttcccttcct ttctcgccac
1801 gttcgccggc tttccccgtc aagctctaaa tcgggggctc cctttagggt tccgatttag
1861 tgctttacgg cacctcgacc ccaaaaaact tgattagggt gatggttcac gtagtgggcc
1921 atcgccctga tagacggttt ttcgcccttt gacgttggag tccacgttct ttaatagtgg
1981 actcttgttc caaactggaa caacactcaa ccctatctcg gtctattctt ttgatttata
2041 agggattttg ccgatttcgg cctattggtt aaaaaatgag ctgatttaac aaaaatttaa
2101 cgcgaatttt aacaaaatat taacgtttac aatttcaggt ggcacttttc ggggaaatgt
2161 gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca aatatgtatc cgctcatgaa
2221 ttaattctta gaaaaactca tcgagcatca aatgaaactg caatttattc atatcaggat
2281 tatcaatacc atatttttga aaaagccgtt tctgtaatga aggagaaaac tcaccgaggc
2341 agttccatag gatggcaaga tcctggtatc ggtctgcgat tccgactcgt ccaacatcaa
2401 tacaacctat taatttcccc tcgtcaaaaa taaggttatc aagtgagaaa tcaccatgag
2461 tgacgactga atccggtgag aatggcaaaa gtttatgcat ttctttccag acttgttcaa
2521 caggccagcc attacgctcg tcatcaaaat cactcgcatc aaccaaaccg ttattcattc
2581 gtgattgcgc ctgagcgaga cgaaatacgc gatcgctgtt aaaaggacaa ttacaaacag
2641 gaatcgaatg caaccggcgc aggaacactg ccagcgcatc aacaatattt tcacctgaat
2701 caggatattc ttctaatacc tggaatgctg ttttcccggg gatcgcagtg gtgagtaacc
2761 atgcatcatc aggagtacgg ataaaatgct tgatggtcgg aagaggcata aattccgtca
2821 gccagtttag tctgaccatc tcatctgtaa catcattggc aacgctacct ttgccatgtt
2881 tcagaaacaa ctctggcgca tcgggcttcc catacaatcg atagattgtc gcacctgatt
2941 gcccgacatt atcgcgagcc catttatacc catataaatc agcatccatg ttggaattta
3001 atcgcggcct agagcaagac gtttcccgtt gaatatggct cataacaccc cttgtattac
3061 tgtttatgta agcagacagt tttattgttc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg
3121 ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt
3181 ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg
3241 ccggatcaag agctaccaac tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata
3301 ccaaatactg tccttctagt gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca
3361 ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag
3421 tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc
3481 tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga
3541 tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg
3601 tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac
3661 gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg
3721 tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg
3781 ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct
3841 gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg ctcgccgcag ccgaacgacc
3901 gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg gaagagcgcc tgatgcggta ttttctcctt
3961 acgcatctgt gcggtatttc acaccgcata tatggtgcac tctcagtaca atctgctctg
4021 atgccgcata gttaagccag tatacactcc gctatcgcta cgtgactggg tcatggctgc
4081 gccccgacac ccgccaacac ccgctgacgc gccctgacgg gcttgtctgc tcccggcatc
4141 cgcttacaga caagctgtga ccgtctccgg gagctgcatg tgtcagaggt tttcaccgtc
4201 atcaccgaaa cgcgcgaggc agctgcggta aagctcatca gcgtggtcgt gaagcgattc
4261 acagatgtct gcctgttcat ccgcgtccag ctcgttgagt ttctccagaa gcgttaatgt
4321 ctggcttctg ataaagcggg ccatgttaag ggcggttttt tcctgtttgg tcactgatgc
4381 ctccgtgtaa gggggatttc tgttcatggg ggtaatgata ccgatgaaac gagagaggat
4441 gctcacgata cgggttactg atgatgaaca tgcccggtta ctggaacgtt gtgagggtaa
4501 acaactggcg gtatggatgc ggcgggacca gagaaaaatc actcagggtc aatgccagcg
4561 cttcgttaat acagatgtag gtgttccaca gggtagccag cagcatcctg cgatgcagat
4621 ccggaacata atggtgcagg gcgctgactt ccgcgtttcc agactttacg aaacacggaa
4681 accgaagacc attcatgttg ttgctcaggt cgcagacgtt ttgcagcagc agtcgcttca
4741 cgttcgctcg cgtatcggtg attcattctg ctaaccagta aggcaacccc gccagcctag
4801 ccgggtcctc aacgacagga gcacgatcat gcgcacccgt ggggccgcca tgccggcgat
4861 aatggcctgc ttctcgccga aacgtttggt ggcgggacca gtgacgaagg cttgagcgag
4921 ggcgtgcaag attccgaata ccgcaagcga caggccgatc atcgtcgcgc tccagcgaaa
4981 gcggtcctcg ccgaaaatga cccagagcgc tgccggcacc tgtcctacga gttgcatgat
5041 aaagaagaca gtcataagtg cggcgacgat agtcatgccc cgcgcccacc ggaaggagct
5101 gactgggttg aaggctctca agggcatcgg tcgagatccc ggtgcctaat gagtgagcta
5161 acttacatta attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca
5221 gctgcattaa tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgccaggg
5281 tggtttttct tttcaccagt gagacgggca acagctgatt gcccttcacc gcctggccct
5341 gagagagttg cagcaagcgg tccacgctgg tttgccccag caggcgaaaa tcctgtttga
5401 tggtggttaa cggcgggata taacatgagc tgtcttcggt atcgtcgtat cccactaccg
5461 agatatccgc accaacgcgc agcccggact cggtaatggc gcgcattgcg cccagcgcca
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5641 gattgcgagt gagatattta tgccagccag ccagacgcag acgcgccgag acagaactta
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6001 gatcggcgcg agatttaatc gccgcgacaa tttgcgacgg cgcgtgcagg gccagactgg
6061 aggtggcaac gccaatcagc aacgactgtt tgcccgccag ttgttgtgcc acgcggttgg
6121 gaatgtaatt cagctccgcc atcgccgctt ccactttttc ccgcgttttc gcagaaacgt
6181 ggctggcctg gttcaccacg cgggaaacgg tctgataaga gacaccggca tactctgcga
6241 catcgtataa cgttactggt ttcacattca ccaccctgaa ttgactctct tccgggcgct
6301 atcatgccat accgcgaaag gttttgcgcc attcgatggt gtccgggatc tcgacgctct
6361 cccttatgcg actcctgcat taggaagcag cccagtagta ggttgaggcc gttgagcacc
6421 gccgccgcaa ggaatggtgc atgcaaggag atggcgccca acagtccccc ggccacgggg
6481 cctgccacca tacccacgcc gaaacaagcg c
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pT7-His-DRD3人源基因质粒
别称: D3DR;ETM1;FET1
| 启动子: | T7 |
|---|
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pT7-His-DRD3是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6511 bp ds-DNA circular SYN 24-八月-2017
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6511
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 141..159
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 160..184
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
misc_feature 199..221
/note="RBS"
CDS 240..257
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
CDS 303..1505
/codon_start=1
/note="DRD3"
/translation="MASLSQLSGHLNYTCGAENSTGASQARPHAYYALSYCALILAIVF
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C"
CDS 1512..1529
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terminator 1596..1643
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
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/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
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/gene="aph(3')-Ia"
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replication"
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/product="Rop protein"
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DELYRSCLARFGDDGENL"
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inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
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ORIGIN
1 tcatgagccc gaagtggcga gcccgatctt ccccatcggt gatgtcggcg atataggcgc
61 cagcaaccgc acctgtggcg ccggtgatgc cggccacgat gcgtccggcg tagaggatcg
121 agatctcgat cccgcgaaat taatacgact cactataggg gaattgtgag cggataacaa
181 ttcccctcta gaaataattt tgtttaactt taagaaggag atataccatg ggcagcagcc
241 atcatcatca tcatcacagc agcggccgcg gatccgaatt cgagctccgt cgacaagctt
301 gcatggcatc tctgagccag ctgagtggcc acctgaacta cacctgtggg gcagagaact
361 ccacaggtgc cagccaggcc cgcccacatg cctactatgc cctctcctac tgcgcgctca
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601 gcatttgctg tgatgttttt gtcaccctgg atgtcatgat gtgtacagcc agcatcctta
661 atctctgtgc catcagcata gacaggtaca ctgcagtggt catgcccgtt cactaccagc
721 atggcacggg acagagctcc tgtcggcgcg tggccctcat gatcacggcc gtctgggtac
781 tggcctttgc tgtgtcctgc cctcttctgt ttggctttaa taccacaggg gaccccactg
841 tctgctccat ctccaaccct gattttgtca tctactcttc agtggtgtcc ttctacctgc
901 cctttggagt gactgtcctt gtctatgcca gaatctatgt ggtgctgaaa caaaggagac
961 ggaaaaggat cctcactcga cagaacagtc agtgcaacag tgtcaggcct ggcttccccc
1021 aacaaaccct ctctcctgac ccggcacatc tggagctgaa gcgttactac agcatctgcc
1081 aggacactgc cttgggtgga ccaggcttcc aagaaagagg aggagagttg aaaagagagg
1141 agaagactcg gaattccctg agtcccacca tagcgcccaa gctcagctta gaagttcgaa
1201 aactcagcaa tggcagatta tcgacatctt tgaagctggg gcccctgcaa cctcggggag
1261 tgccacttcg ggagaagaag gcaacccaaa tggtggccat tgtgcttggg gccttcattg
1321 tctgctggct gcccttcttc ttgacccatg ttctcaatac ccactgccag acatgccacg
1381 tgtccccaga gctttacagt gccacgacat ggctgggcta cgtgaatagc gccctcaacc
1441 ctgtgatcta taccaccttc aatatcgagt tccggaaagc cttcctcaag atcctgtctt
1501 gctgactcga gcaccaccac caccaccact gagatccggc tgctaacaaa gcccgaaagg
1561 aagctgagtt ggctgctgcc accgctgagc aataactagc ataacccctt ggggcctcta
1621 aacgggtctt gaggggtttt ttgctgaaag gaggaactat atccggattg gcgaatggga
1681 cgcgccctgt agcggcgcat taagcgcggc gggtgtggtg gttacgcgca gcgtgaccgc
1741 tacacttgcc agcgccctag cgcccgctcc tttcgctttc ttcccttcct ttctcgccac
1801 gttcgccggc tttccccgtc aagctctaaa tcgggggctc cctttagggt tccgatttag
1861 tgctttacgg cacctcgacc ccaaaaaact tgattagggt gatggttcac gtagtgggcc
1921 atcgccctga tagacggttt ttcgcccttt gacgttggag tccacgttct ttaatagtgg
1981 actcttgttc caaactggaa caacactcaa ccctatctcg gtctattctt ttgatttata
2041 agggattttg ccgatttcgg cctattggtt aaaaaatgag ctgatttaac aaaaatttaa
2101 cgcgaatttt aacaaaatat taacgtttac aatttcaggt ggcacttttc ggggaaatgt
2161 gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca aatatgtatc cgctcatgaa
2221 ttaattctta gaaaaactca tcgagcatca aatgaaactg caatttattc atatcaggat
2281 tatcaatacc atatttttga aaaagccgtt tctgtaatga aggagaaaac tcaccgaggc
2341 agttccatag gatggcaaga tcctggtatc ggtctgcgat tccgactcgt ccaacatcaa
2401 tacaacctat taatttcccc tcgtcaaaaa taaggttatc aagtgagaaa tcaccatgag
2461 tgacgactga atccggtgag aatggcaaaa gtttatgcat ttctttccag acttgttcaa
2521 caggccagcc attacgctcg tcatcaaaat cactcgcatc aaccaaaccg ttattcattc
2581 gtgattgcgc ctgagcgaga cgaaatacgc gatcgctgtt aaaaggacaa ttacaaacag
2641 gaatcgaatg caaccggcgc aggaacactg ccagcgcatc aacaatattt tcacctgaat
2701 caggatattc ttctaatacc tggaatgctg ttttcccggg gatcgcagtg gtgagtaacc
2761 atgcatcatc aggagtacgg ataaaatgct tgatggtcgg aagaggcata aattccgtca
2821 gccagtttag tctgaccatc tcatctgtaa catcattggc aacgctacct ttgccatgtt
2881 tcagaaacaa ctctggcgca tcgggcttcc catacaatcg atagattgtc gcacctgatt
2941 gcccgacatt atcgcgagcc catttatacc catataaatc agcatccatg ttggaattta
3001 atcgcggcct agagcaagac gtttcccgtt gaatatggct cataacaccc cttgtattac
3061 tgtttatgta agcagacagt tttattgttc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg
3121 ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt
3181 ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg
3241 ccggatcaag agctaccaac tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata
3301 ccaaatactg tccttctagt gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca
3361 ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag
3421 tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc
3481 tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga
3541 tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg
3601 tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac
3661 gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg
3721 tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg
3781 ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct
3841 gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg ctcgccgcag ccgaacgacc
3901 gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg gaagagcgcc tgatgcggta ttttctcctt
3961 acgcatctgt gcggtatttc acaccgcata tatggtgcac tctcagtaca atctgctctg
4021 atgccgcata gttaagccag tatacactcc gctatcgcta cgtgactggg tcatggctgc
4081 gccccgacac ccgccaacac ccgctgacgc gccctgacgg gcttgtctgc tcccggcatc
4141 cgcttacaga caagctgtga ccgtctccgg gagctgcatg tgtcagaggt tttcaccgtc
4201 atcaccgaaa cgcgcgaggc agctgcggta aagctcatca gcgtggtcgt gaagcgattc
4261 acagatgtct gcctgttcat ccgcgtccag ctcgttgagt ttctccagaa gcgttaatgt
4321 ctggcttctg ataaagcggg ccatgttaag ggcggttttt tcctgtttgg tcactgatgc
4381 ctccgtgtaa gggggatttc tgttcatggg ggtaatgata ccgatgaaac gagagaggat
4441 gctcacgata cgggttactg atgatgaaca tgcccggtta ctggaacgtt gtgagggtaa
4501 acaactggcg gtatggatgc ggcgggacca gagaaaaatc actcagggtc aatgccagcg
4561 cttcgttaat acagatgtag gtgttccaca gggtagccag cagcatcctg cgatgcagat
4621 ccggaacata atggtgcagg gcgctgactt ccgcgtttcc agactttacg aaacacggaa
4681 accgaagacc attcatgttg ttgctcaggt cgcagacgtt ttgcagcagc agtcgcttca
4741 cgttcgctcg cgtatcggtg attcattctg ctaaccagta aggcaacccc gccagcctag
4801 ccgggtcctc aacgacagga gcacgatcat gcgcacccgt ggggccgcca tgccggcgat
4861 aatggcctgc ttctcgccga aacgtttggt ggcgggacca gtgacgaagg cttgagcgag
4921 ggcgtgcaag attccgaata ccgcaagcga caggccgatc atcgtcgcgc tccagcgaaa
4981 gcggtcctcg ccgaaaatga cccagagcgc tgccggcacc tgtcctacga gttgcatgat
5041 aaagaagaca gtcataagtg cggcgacgat agtcatgccc cgcgcccacc ggaaggagct
5101 gactgggttg aaggctctca agggcatcgg tcgagatccc ggtgcctaat gagtgagcta
5161 acttacatta attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca
5221 gctgcattaa tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgccaggg
5281 tggtttttct tttcaccagt gagacgggca acagctgatt gcccttcacc gcctggccct
5341 gagagagttg cagcaagcgg tccacgctgg tttgccccag caggcgaaaa tcctgtttga
5401 tggtggttaa cggcgggata taacatgagc tgtcttcggt atcgtcgtat cccactaccg
5461 agatatccgc accaacgcgc agcccggact cggtaatggc gcgcattgcg cccagcgcca
5521 tctgatcgtt ggcaaccagc atcgcagtgg gaacgatgcc ctcattcagc atttgcatgg
5581 tttgttgaaa accggacatg gcactccagt cgccttcccg ttccgctatc ggctgaattt
5641 gattgcgagt gagatattta tgccagccag ccagacgcag acgcgccgag acagaactta
5701 atgggcccgc taacagcgcg atttgctggt gacccaatgc gaccagatgc tccacgccca
5761 gtcgcgtacc gtcttcatgg gagaaaataa tactgttgat gggtgtctgg tcagagacat
5821 caagaaataa cgccggaaca ttagtgcagg cagcttccac agcaatggca tcctggtcat
5881 ccagcggata gttaatgatc agcccactga cgcgttgcgc gagaagattg tgcaccgccg
5941 ctttacaggc ttcgacgccg cttcgttcta ccatcgacac caccacgctg gcacccagtt
6001 gatcggcgcg agatttaatc gccgcgacaa tttgcgacgg cgcgtgcagg gccagactgg
6061 aggtggcaac gccaatcagc aacgactgtt tgcccgccag ttgttgtgcc acgcggttgg
6121 gaatgtaatt cagctccgcc atcgccgctt ccactttttc ccgcgttttc gcagaaacgt
6181 ggctggcctg gttcaccacg cgggaaacgg tctgataaga gacaccggca tactctgcga
6241 catcgtataa cgttactggt ttcacattca ccaccctgaa ttgactctct tccgggcgct
6301 atcatgccat accgcgaaag gttttgcgcc attcgatggt gtccgggatc tcgacgctct
6361 cccttatgcg actcctgcat taggaagcag cccagtagta ggttgaggcc gttgagcacc
6421 gccgccgcaa ggaatggtgc atgcaaggag atggcgccca acagtccccc ggccacgggg
6481 cctgccacca tacccacgcc gaaacaagcg c
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1330/pCDNA3.1-Acod1-6×HIS人源基因质粒 |
| P1329/pCMV-FLAG-KCNMA1人源基因质粒 |
| P1349/pMIG-hNFATc2/C-AVITEV人源基因质粒 |
| P1356/GFP-BAZ1A人源基因质粒 |
| P1357/pECMV-3×FLAG-DPP8人源基因质粒 |
| P1408/pcDNA FLAG Lamp 2b-HA人源基因质粒 |
| P1572/pCDNA3-EGFP-Ash2L人源基因质粒 |
| P1409/SIRT5 FLAG人源基因质粒 |
| P1573/hTLR2 FLAG人源基因质粒 |
| P1424/pCIG-CNGA1-FLAG人源基因质粒 |
| P1574/pCIG-CNGA1-G622A人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
shinesnowing 想构建一个能通过接合作用进入野生型弧菌并在其中表达外源基因的质粒，现在找到一个名为pBOR8的质粒，只有质粒简图，没找到全序列，质粒上的元件为ori R6K、mob RP4、Ap、lacIq，如下图: 现有两个问题想请教各位高人 （1）该质粒能否直接作为表达载体，将外源基因克隆到该质粒上，如果可以通常外源基因应该克隆到哪个位点？ （2）如果不能直接进行外源基因克隆和表达，那么应该
分，一是未稳定整合的，一是稳定整合的，所以开始时亮度要高。 2.为什么筛选后单克隆无荧光：首先，经过G418筛选，外源质粒不能整合入染色体的细胞死亡；其次，稳定整合的细胞外源质粒整合的位置存在位置效应，即整合于不利于外源基因表达的位置，从而使外源基因沉默；第三，我不知道你的质粒中是否加入了核糖体进入位点序列，如果有的话，研究显示该位点前后的基因表达水平存在不同，可以查查相关文献 3.有无好的办法：我认为没有，稳定转染筛选时有运气的成分，假如外源质粒恰好整合到了利于表达的染色体部位，这时筛
一、实验目的 学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。 二、实验原理 上图所示是脂质体介导转染的示意图，它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。 外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入
pT7-His-DRD3人源基因质粒
￥100 - 1000
