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- 上海
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- 2026年01月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#44241
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pET28a-hpKM1人源基因质粒
别称: Plasmid#44241
复制子: pBR322
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pET28a-hpKM1是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6967 bp ds-DNA circular SYN 05-NOV-2016
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6967
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 55..73
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 74..98
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
RBS 113..135
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
CDS 154..171
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
CDS 181..198
/codon_start=1
/product="thrombin recognition and cleavage site"
/note="thrombin site"
/translation="LVPRGS"
CDS 202..234
/codon_start=1
/product="leader peptide from bacteriophage T7 gene 10"
/note="T7 tag (gene 10 leader)"
/note="promotes efficient translation in E. coli"
/translation="MASMTGGQQMG"
CDS 250..1845
/codon_start=1
/note="PKM1"
/translation="MSKPHSEAGTAFIQTQQLHAAMADTFLEHMCRLDIDSPPITARNT
GIICTIGPASRSVETLKEMIKSGMNVARLNFSHGTHEYHAETIKNVRTATESFASDPIL
YRPVAVALDTKGPEIRTGLIKGSGTAEVELKKGATLKITLDNAYMEKCDENILWLDYKN
ICKVVEVGSKIYVDDGLISLQVKQKGADFLVTEVENGGSLGSKKGVNLPGAAVDLPAVS
EKDIQDLKFGVEQDVDMVFASFIRKASDVHEVRKVLGEKGKNIKIISKIENHEGVRRFD
EILEASDGIMVARGDLGIEIPAEKVFLAQKMMIGRCNRAGKPVICATQMLESMIKKPRP
TRAEGSDVANAVLDGADCIMLSGETAKGDYPLEAVRMQHLIAREAEAAMFHRKLFEELV
RASSHSTDLMEAMAMGSVEASYKCLAAALIVLTESGRSAHQVARYRPRAPIIAVTRNPQ
TARQAHLYRGIFPVLCKDPVQEAWAEDVDLRVNFAMNVGKARGFFKKGDVVIVLTGWRP
GSGFTNTMRVVPVP"
CDS 1886..1903
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
terminator 1970..2017
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
rep_origin 2054..2509
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
CDS complement(2601..3416)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418
(Geneticin(R)) in eukaryotes"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
rep_origin 3538..4126
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
misc_feature 4312..4451
/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
CDS complement(4553..4744)
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
CDS complement(5553..6635)
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(6636..6713)
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
ORIGIN
1 atgccggcca cgatgcgtcc ggcgtagagg atcgagatct cgatcccgcg aaattaatac
61 gactcactat aggggaattg tgagcggata acaattcccc tctagaaata attttgttta
121 actttaagaa ggagatatac catgggcagc agccatcatc atcatcatca cagcagcggc
181 ctggtgccgc gcggcagcca tatggctagc atgactggtg gacagcaaat gggtcgcgga
241 tccgaattca tgtcgaagcc ccatagtgaa gccgggactg ccttcattca gacccagcag
301 ctgcacgcag ccatggctga cacattcctg gagcacatgt gccgcctgga cattgattca
361 ccacccatca cagcccggaa cactggcatc atctgtacca ttggcccagc ttcccgatca
421 gtggagacgt tgaaggagat gattaagtct ggaatgaatg tggctcgtct gaacttctct
481 catggaactc atgagtacca tgcggagacc atcaagaatg tgcgcacagc cacggaaagc
541 tttgcttctg accccatcct ctaccggccc gttgctgtgg ctctagacac taaaggacct
601 gagatccgaa ctgggctcat caagggcagc ggcactgcag aggtggagct gaagaaggga
661 gccactctca aaatcacgct ggataacgcc tacatggaaa agtgtgacga gaacatcctg
721 tggctggact acaagaacat ctgcaaggtg gtggaagtgg gcagcaagat ctacgtggat
781 gatgggctta tttctctcca ggtgaagcag aaaggtgccg acttcctggt gacggaggtg
841 gaaaatggtg gctccttggg cagcaagaag ggtgtgaacc ttcctggggc tgctgtggac
901 ttgcctgctg tgtcggagaa ggacatccag gatctgaagt ttggggtcga gcaggatgtt
961 gatatggtgt ttgcgtcatt catccgcaag gcatctgatg tccatgaagt taggaaggtc
1021 ctgggagaga agggaaagaa catcaagatt atcagcaaaa tcgagaatca tgagggggtt
1081 cggaggtttg atgaaatcct ggaggccagt gatgggatca tggtggctcg tggtgatcta
1141 ggcattgaga ttcctgcaga gaaggtcttc cttgctcaga agatgatgat tggacggtgc
1201 aaccgagctg ggaagcctgt catctgtgct actcagatgc tggagagcat gatcaagaag
1261 ccccgcccca ctcgggctga aggcagtgat gtggccaatg cagtcctgga tggagccgac
1321 tgcatcatgc tgtctggaga aacagccaaa ggggactatc ctctggaggc tgtgcgcatg
1381 cagcacctga tagctcgtga ggctgaggca gccatgttcc accgcaagct gtttgaagaa
1441 cttgtgcgag cctcaagtca ctccacagac ctcatggaag ccatggccat gggcagcgtg
1501 gaggcttctt ataagtgttt agcagcagct ttgatagttc tgacggagtc tggcaggtct
1561 gctcaccagg tggccagata ccgcccacgt gcccccatca ttgctgtgac ccggaatccc
1621 cagacagctc gtcaggccca cctgtaccgt ggcatcttcc ctgtgctgtg caaggaccca
1681 gtccaggagg cctgggctga ggacgtggac ctccgggtga actttgccat gaatgttggc
1741 aaggcccgag gcttcttcaa gaagggagat gtggtcattg tgctgaccgg atggcgccct
1801 ggctccggct tcaccaacac catgcgtgtt gttcctgtgc cgtgagaatt cgagctccgt
1861 cgacaagctt gcggccgcac tcgagcacca ccaccaccac cactgagatc cggctgctaa
1921 caaagcccga aaggaagctg agttggctgc tgccaccgct gagcaataac tagcataacc
1981 ccttggggcc tctaaacggg tcttgagggg ttttttgctg aaaggaggaa ctatatccgg
2041 attggcgaat gggacgcgcc ctgtagcggc gcattaagcg cggcgggtgt ggtggttacg
2101 cgcagcgtga ccgctacact tgccagcgcc ctagcgcccg ctcctttcgc tttcttccct
2161 tcctttctcg ccacgttcgc cggctttccc cgtcaagctc taaatcgggg gctcccttta
2221 gggttccgat ttagtgcttt acggcacctc gaccccaaaa aacttgatta gggtgatggt
2281 tcacgtagtg ggccatcgcc ctgatagacg gtttttcgcc ctttgacgtt ggagtccacg
2341 ttctttaata gtggactctt gttccaaact ggaacaacac tcaaccctat ctcggtctat
2401 tcttttgatt tataagggat tttgccgatt tcggcctatt ggttaaaaaa tgagctgatt
2461 taacaaaaat ttaacgcgaa ttttaacaaa atattaacgc ttacaattta ggtggcactt
2521 ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt
2581 atccgctcat gaattaattc ttagaaaaac tcatcgagca tcaaatgaaa ctgcaattta
2641 ttcatatcag gattatcaat accatatttt tgaaaaagcc gtttctgtaa tgaaggagaa
2701 aactcaccga ggcagttcca taggatggca agatcctggt atcggtctgc gattccgact
2761 cgtccaacat caatacaacc tattaatttc ccctcgtcaa aaataaggtt atcaagtgag
2821 aaatcaccat gagtgacgac tgaatccggt gagaatggca aaagtttatg catttctttc
2881 cagacttgtt caacaggcca gccattacgc tcgtcatcaa aatcactcgc atcaaccaaa
2941 ccgttattca ttcgtgattg cgcctgagcg agacgaaata cgcgatcgct gttaaaagga
3001 caattacaaa caggaatcga atgcaaccgg cgcaggaaca ctgccagcgc atcaacaata
3061 ttttcacctg aatcaggata ttcttctaat acctggaatg ctgttttccc ggggatcgca
3121 gtggtgagta accatgcatc atcaggagta cggataaaat gcttgatggt cggaagaggc
3181 ataaattccg tcagccagtt tagtctgacc atctcatctg taacatcatt ggcaacgcta
3241 cctttgccat gtttcagaaa caactctggc gcatcgggct tcccatacaa tcgatagatt
3301 gtcgcacctg attgcccgac attatcgcga gcccatttat acccatataa atcagcatcc
3361 atgttggaat ttaatcgcgg cctagagcaa gacgtttccc gttgaatatg gctcataaca
3421 ccccttgtat tactgtttat gtaagcagac agttttattg ttcatgacca aaatccctta
3481 acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga ccccgtagaa aagatcaaag gatcttcttg
3541 agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc
3601 ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag
3661 cagagcgcag ataccaaata ctgtccttct agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa
3721 gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc
3781 cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga cgatagttac cggataaggc
3841 gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc gaacgaccta
3901 caccgaactg agatacctac agcgtgagct atgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag
3961 aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct
4021 tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga
4081 gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg ccagcaacgc
4141 ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct cacatgttct ttcctgcgtt
4201 atcccctgat tctgtggata accgtattac cgcctttgag tgagctgata ccgctcgccg
4261 cagccgaacg accgagcgca gcgagtcagt gagcgaggaa gcggaagagc gcctgatgcg
4321 gtattttctc cttacgcatc tgtgcggtat ttcacaccgc aatggtgcac tctcagtaca
4381 atctgctctg atgccgcata gttaagccag tatacactcc gctatcgcta cgtgactggg
4441 tcatggctgc gccccgacac ccgccaacac ccgctgacgc gccctgacgg gcttgtctgc
4501 tcccggcatc cgcttacaga caagctgtga ccgtctccgg gagctgcatg tgtcagaggt
4561 tttcaccgtc atcaccgaaa cgcgcgaggc agctgcggta aagctcatca gcgtggtcgt
4621 gaagcgattc acagatgtct gcctgttcat ccgcgtccag ctcgttgagt ttctccagaa
4681 gcgttaatgt ctggcttctg ataaagcggg ccatgttaag ggcggttttt tcctgtttgg
4741 tcactgatgc ctccgtgtaa gggggatttc tgttcatggg ggtaatgata ccgatgaaac
4801 gagagaggat gctcacgata cgggttactg atgatgaaca tgcccggtta ctggaacgtt
4861 gtgagggtaa acaactggcg gtatggatgc ggcgggacca gagaaaaatc actcagggtc
4921 aatgccagcg cttcgttaat acagatgtag gtgttccaca gggtagccag cagcatcctg
4981 cgatgcagat ccggaacata atggtgcagg gcgctgactt ccgcgtttcc agactttacg
5041 aaacacggaa accgaagacc attcatgttg ttgctcaggt cgcagacgtt ttgcagcagc
5101 agtcgcttca cgttcgctcg cgtatcggtg attcattctg ctaaccagta aggcaacccc
5161 gccagcctag ccgggtcctc aacgacagga gcacgatcat gcgcacccgt ggggccgcca
5221 tgccggcgat aatggcctgc ttctcgccga aacgtttggt ggcgggacca gtgacgaagg
5281 cttgagcgag ggcgtgcaag attccgaata ccgcaagcga caggccgatc atcgtcgcgc
5341 tccagcgaaa gcggtcctcg ccgaaaatga cccagagcgc tgccggcacc tgtcctacga
5401 gttgcatgat aaagaagaca gtcataagtg cggcgacgat agtcatgccc cgcgcccacc
5461 ggaaggagct gactgggttg aaggctctca agggcatcgg tcgagatccc ggtgcctaat
5521 gagtgagcta acttacatta attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc
5581 tgtcgtgcca gctgcattaa tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg
5641 ggcgccaggg tggtttttct tttcaccagt gagacgggca acagctgatt gcccttcacc
5701 gcctggccct gagagagttg cagcaagcgg tccacgctgg tttgccccag caggcgaaaa
5761 tcctgtttga tggtggttaa cggcgggata taacatgagc tgtcttcggt atcgtcgtat
5821 cccactaccg agatatccgc accaacgcgc agcccggact cggtaatggc gcgcattgcg
5881 cccagcgcca tctgatcgtt ggcaaccagc atcgcagtgg gaacgatgcc ctcattcagc
5941 atttgcatgg tttgttgaaa accggacatg gcactccagt cgccttcccg ttccgctatc
6001 ggctgaattt gattgcgagt gagatattta tgccagccag ccagacgcag acgcgccgag
6061 acagaactta atgggcccgc taacagcgcg atttgctggt gacccaatgc gaccagatgc
6121 tccacgccca gtcgcgtacc gtcttcatgg gagaaaataa tactgttgat gggtgtctgg
6181 tcagagacat caagaaataa cgccggaaca ttagtgcagg cagcttccac agcaatggca
6241 tcctggtcat ccagcggata gttaatgatc agcccactga cgcgttgcgc gagaagattg
6301 tgcaccgccg ctttacaggc ttcgacgccg cttcgttcta ccatcgacac caccacgctg
6361 gcacccagtt gatcggcgcg agatttaatc gccgcgacaa tttgcgacgg cgcgtgcagg
6421 gccagactgg aggtggcaac gccaatcagc aacgactgtt tgcccgccag ttgttgtgcc
6481 acgcggttgg gaatgtaatt cagctccgcc atcgccgctt ccactttttc ccgcgttttc
6541 gcagaaacgt ggctggcctg gttcaccacg cgggaaacgg tctgataaga gacaccggca
6601 tactctgcga catcgtataa cgttactggt ttcacattca ccaccctgaa ttgactctct
6661 tccgggcgct atcatgccat accgcgaaag gttttgcgcc attcgatggt gtccgggatc
6721 tcgacgctct cccttatgcg actcctgcat taggaagcag cccagtagta ggttgaggcc
6781 gttgagcacc gccgccgcaa ggaatggtgc atgcaaggag atggcgccca acagtccccc
6841 ggccacgggg cctgccacca tacccacgcc gaaacaagcg ctcatgagcc cgaagtggcg
6901 agcccgatct tccccatcgg tgatgtcggc gatataggcg ccagcaaccg cacctgtggc
6961 gccggtg
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pET28a-hpKM1人源基因质粒
别称: Plasmid#44241
| 启动子: | T7 |
|---|
| 质粒分类: | 基因库质粒 |
|---|
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pET28a-hpKM1是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6967 bp ds-DNA circular SYN 05-NOV-2016
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6967
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 55..73
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 74..98
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
RBS 113..135
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
CDS 154..171
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
CDS 181..198
/codon_start=1
/product="thrombin recognition and cleavage site"
/note="thrombin site"
/translation="LVPRGS"
CDS 202..234
/codon_start=1
/product="leader peptide from bacteriophage T7 gene 10"
/note="T7 tag (gene 10 leader)"
/note="promotes efficient translation in E. coli"
/translation="MASMTGGQQMG"
CDS 250..1845
/codon_start=1
/note="PKM1"
/translation="MSKPHSEAGTAFIQTQQLHAAMADTFLEHMCRLDIDSPPITARNT
GIICTIGPASRSVETLKEMIKSGMNVARLNFSHGTHEYHAETIKNVRTATESFASDPIL
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ICKVVEVGSKIYVDDGLISLQVKQKGADFLVTEVENGGSLGSKKGVNLPGAAVDLPAVS
EKDIQDLKFGVEQDVDMVFASFIRKASDVHEVRKVLGEKGKNIKIISKIENHEGVRRFD
EILEASDGIMVARGDLGIEIPAEKVFLAQKMMIGRCNRAGKPVICATQMLESMIKKPRP
TRAEGSDVANAVLDGADCIMLSGETAKGDYPLEAVRMQHLIAREAEAAMFHRKLFEELV
RASSHSTDLMEAMAMGSVEASYKCLAAALIVLTESGRSAHQVARYRPRAPIIAVTRNPQ
TARQAHLYRGIFPVLCKDPVQEAWAEDVDLRVNFAMNVGKARGFFKKGDVVIVLTGWRP
GSGFTNTMRVVPVP"
CDS 1886..1903
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/note="6xHis"
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/note="T7 terminator"
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polymerase"
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/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
CDS complement(2601..3416)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418
(Geneticin(R)) in eukaryotes"
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KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
rep_origin 3538..4126
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
misc_feature 4312..4451
/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
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/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
CDS complement(5553..6635)
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(6636..6713)
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
ORIGIN
1 atgccggcca cgatgcgtcc ggcgtagagg atcgagatct cgatcccgcg aaattaatac
61 gactcactat aggggaattg tgagcggata acaattcccc tctagaaata attttgttta
121 actttaagaa ggagatatac catgggcagc agccatcatc atcatcatca cagcagcggc
181 ctggtgccgc gcggcagcca tatggctagc atgactggtg gacagcaaat gggtcgcgga
241 tccgaattca tgtcgaagcc ccatagtgaa gccgggactg ccttcattca gacccagcag
301 ctgcacgcag ccatggctga cacattcctg gagcacatgt gccgcctgga cattgattca
361 ccacccatca cagcccggaa cactggcatc atctgtacca ttggcccagc ttcccgatca
421 gtggagacgt tgaaggagat gattaagtct ggaatgaatg tggctcgtct gaacttctct
481 catggaactc atgagtacca tgcggagacc atcaagaatg tgcgcacagc cacggaaagc
541 tttgcttctg accccatcct ctaccggccc gttgctgtgg ctctagacac taaaggacct
601 gagatccgaa ctgggctcat caagggcagc ggcactgcag aggtggagct gaagaaggga
661 gccactctca aaatcacgct ggataacgcc tacatggaaa agtgtgacga gaacatcctg
721 tggctggact acaagaacat ctgcaaggtg gtggaagtgg gcagcaagat ctacgtggat
781 gatgggctta tttctctcca ggtgaagcag aaaggtgccg acttcctggt gacggaggtg
841 gaaaatggtg gctccttggg cagcaagaag ggtgtgaacc ttcctggggc tgctgtggac
901 ttgcctgctg tgtcggagaa ggacatccag gatctgaagt ttggggtcga gcaggatgtt
961 gatatggtgt ttgcgtcatt catccgcaag gcatctgatg tccatgaagt taggaaggtc
1021 ctgggagaga agggaaagaa catcaagatt atcagcaaaa tcgagaatca tgagggggtt
1081 cggaggtttg atgaaatcct ggaggccagt gatgggatca tggtggctcg tggtgatcta
1141 ggcattgaga ttcctgcaga gaaggtcttc cttgctcaga agatgatgat tggacggtgc
1201 aaccgagctg ggaagcctgt catctgtgct actcagatgc tggagagcat gatcaagaag
1261 ccccgcccca ctcgggctga aggcagtgat gtggccaatg cagtcctgga tggagccgac
1321 tgcatcatgc tgtctggaga aacagccaaa ggggactatc ctctggaggc tgtgcgcatg
1381 cagcacctga tagctcgtga ggctgaggca gccatgttcc accgcaagct gtttgaagaa
1441 cttgtgcgag cctcaagtca ctccacagac ctcatggaag ccatggccat gggcagcgtg
1501 gaggcttctt ataagtgttt agcagcagct ttgatagttc tgacggagtc tggcaggtct
1561 gctcaccagg tggccagata ccgcccacgt gcccccatca ttgctgtgac ccggaatccc
1621 cagacagctc gtcaggccca cctgtaccgt ggcatcttcc ctgtgctgtg caaggaccca
1681 gtccaggagg cctgggctga ggacgtggac ctccgggtga actttgccat gaatgttggc
1741 aaggcccgag gcttcttcaa gaagggagat gtggtcattg tgctgaccgg atggcgccct
1801 ggctccggct tcaccaacac catgcgtgtt gttcctgtgc cgtgagaatt cgagctccgt
1861 cgacaagctt gcggccgcac tcgagcacca ccaccaccac cactgagatc cggctgctaa
1921 caaagcccga aaggaagctg agttggctgc tgccaccgct gagcaataac tagcataacc
1981 ccttggggcc tctaaacggg tcttgagggg ttttttgctg aaaggaggaa ctatatccgg
2041 attggcgaat gggacgcgcc ctgtagcggc gcattaagcg cggcgggtgt ggtggttacg
2101 cgcagcgtga ccgctacact tgccagcgcc ctagcgcccg ctcctttcgc tttcttccct
2161 tcctttctcg ccacgttcgc cggctttccc cgtcaagctc taaatcgggg gctcccttta
2221 gggttccgat ttagtgcttt acggcacctc gaccccaaaa aacttgatta gggtgatggt
2281 tcacgtagtg ggccatcgcc ctgatagacg gtttttcgcc ctttgacgtt ggagtccacg
2341 ttctttaata gtggactctt gttccaaact ggaacaacac tcaaccctat ctcggtctat
2401 tcttttgatt tataagggat tttgccgatt tcggcctatt ggttaaaaaa tgagctgatt
2461 taacaaaaat ttaacgcgaa ttttaacaaa atattaacgc ttacaattta ggtggcactt
2521 ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt
2581 atccgctcat gaattaattc ttagaaaaac tcatcgagca tcaaatgaaa ctgcaattta
2641 ttcatatcag gattatcaat accatatttt tgaaaaagcc gtttctgtaa tgaaggagaa
2701 aactcaccga ggcagttcca taggatggca agatcctggt atcggtctgc gattccgact
2761 cgtccaacat caatacaacc tattaatttc ccctcgtcaa aaataaggtt atcaagtgag
2821 aaatcaccat gagtgacgac tgaatccggt gagaatggca aaagtttatg catttctttc
2881 cagacttgtt caacaggcca gccattacgc tcgtcatcaa aatcactcgc atcaaccaaa
2941 ccgttattca ttcgtgattg cgcctgagcg agacgaaata cgcgatcgct gttaaaagga
3001 caattacaaa caggaatcga atgcaaccgg cgcaggaaca ctgccagcgc atcaacaata
3061 ttttcacctg aatcaggata ttcttctaat acctggaatg ctgttttccc ggggatcgca
3121 gtggtgagta accatgcatc atcaggagta cggataaaat gcttgatggt cggaagaggc
3181 ataaattccg tcagccagtt tagtctgacc atctcatctg taacatcatt ggcaacgcta
3241 cctttgccat gtttcagaaa caactctggc gcatcgggct tcccatacaa tcgatagatt
3301 gtcgcacctg attgcccgac attatcgcga gcccatttat acccatataa atcagcatcc
3361 atgttggaat ttaatcgcgg cctagagcaa gacgtttccc gttgaatatg gctcataaca
3421 ccccttgtat tactgtttat gtaagcagac agttttattg ttcatgacca aaatccctta
3481 acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga ccccgtagaa aagatcaaag gatcttcttg
3541 agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc
3601 ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag
3661 cagagcgcag ataccaaata ctgtccttct agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa
3721 gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc
3781 cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga cgatagttac cggataaggc
3841 gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc gaacgaccta
3901 caccgaactg agatacctac agcgtgagct atgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag
3961 aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct
4021 tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga
4081 gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg ccagcaacgc
4141 ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct cacatgttct ttcctgcgtt
4201 atcccctgat tctgtggata accgtattac cgcctttgag tgagctgata ccgctcgccg
4261 cagccgaacg accgagcgca gcgagtcagt gagcgaggaa gcggaagagc gcctgatgcg
4321 gtattttctc cttacgcatc tgtgcggtat ttcacaccgc aatggtgcac tctcagtaca
4381 atctgctctg atgccgcata gttaagccag tatacactcc gctatcgcta cgtgactggg
4441 tcatggctgc gccccgacac ccgccaacac ccgctgacgc gccctgacgg gcttgtctgc
4501 tcccggcatc cgcttacaga caagctgtga ccgtctccgg gagctgcatg tgtcagaggt
4561 tttcaccgtc atcaccgaaa cgcgcgaggc agctgcggta aagctcatca gcgtggtcgt
4621 gaagcgattc acagatgtct gcctgttcat ccgcgtccag ctcgttgagt ttctccagaa
4681 gcgttaatgt ctggcttctg ataaagcggg ccatgttaag ggcggttttt tcctgtttgg
4741 tcactgatgc ctccgtgtaa gggggatttc tgttcatggg ggtaatgata ccgatgaaac
4801 gagagaggat gctcacgata cgggttactg atgatgaaca tgcccggtta ctggaacgtt
4861 gtgagggtaa acaactggcg gtatggatgc ggcgggacca gagaaaaatc actcagggtc
4921 aatgccagcg cttcgttaat acagatgtag gtgttccaca gggtagccag cagcatcctg
4981 cgatgcagat ccggaacata atggtgcagg gcgctgactt ccgcgtttcc agactttacg
5041 aaacacggaa accgaagacc attcatgttg ttgctcaggt cgcagacgtt ttgcagcagc
5101 agtcgcttca cgttcgctcg cgtatcggtg attcattctg ctaaccagta aggcaacccc
5161 gccagcctag ccgggtcctc aacgacagga gcacgatcat gcgcacccgt ggggccgcca
5221 tgccggcgat aatggcctgc ttctcgccga aacgtttggt ggcgggacca gtgacgaagg
5281 cttgagcgag ggcgtgcaag attccgaata ccgcaagcga caggccgatc atcgtcgcgc
5341 tccagcgaaa gcggtcctcg ccgaaaatga cccagagcgc tgccggcacc tgtcctacga
5401 gttgcatgat aaagaagaca gtcataagtg cggcgacgat agtcatgccc cgcgcccacc
5461 ggaaggagct gactgggttg aaggctctca agggcatcgg tcgagatccc ggtgcctaat
5521 gagtgagcta acttacatta attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc
5581 tgtcgtgcca gctgcattaa tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg
5641 ggcgccaggg tggtttttct tttcaccagt gagacgggca acagctgatt gcccttcacc
5701 gcctggccct gagagagttg cagcaagcgg tccacgctgg tttgccccag caggcgaaaa
5761 tcctgtttga tggtggttaa cggcgggata taacatgagc tgtcttcggt atcgtcgtat
5821 cccactaccg agatatccgc accaacgcgc agcccggact cggtaatggc gcgcattgcg
5881 cccagcgcca tctgatcgtt ggcaaccagc atcgcagtgg gaacgatgcc ctcattcagc
5941 atttgcatgg tttgttgaaa accggacatg gcactccagt cgccttcccg ttccgctatc
6001 ggctgaattt gattgcgagt gagatattta tgccagccag ccagacgcag acgcgccgag
6061 acagaactta atgggcccgc taacagcgcg atttgctggt gacccaatgc gaccagatgc
6121 tccacgccca gtcgcgtacc gtcttcatgg gagaaaataa tactgttgat gggtgtctgg
6181 tcagagacat caagaaataa cgccggaaca ttagtgcagg cagcttccac agcaatggca
6241 tcctggtcat ccagcggata gttaatgatc agcccactga cgcgttgcgc gagaagattg
6301 tgcaccgccg ctttacaggc ttcgacgccg cttcgttcta ccatcgacac caccacgctg
6361 gcacccagtt gatcggcgcg agatttaatc gccgcgacaa tttgcgacgg cgcgtgcagg
6421 gccagactgg aggtggcaac gccaatcagc aacgactgtt tgcccgccag ttgttgtgcc
6481 acgcggttgg gaatgtaatt cagctccgcc atcgccgctt ccactttttc ccgcgttttc
6541 gcagaaacgt ggctggcctg gttcaccacg cgggaaacgg tctgataaga gacaccggca
6601 tactctgcga catcgtataa cgttactggt ttcacattca ccaccctgaa ttgactctct
6661 tccgggcgct atcatgccat accgcgaaag gttttgcgcc attcgatggt gtccgggatc
6721 tcgacgctct cccttatgcg actcctgcat taggaagcag cccagtagta ggttgaggcc
6781 gttgagcacc gccgccgcaa ggaatggtgc atgcaaggag atggcgccca acagtccccc
6841 ggccacgggg cctgccacca tacccacgcc gaaacaagcg ctcatgagcc cgaagtggcg
6901 agcccgatct tccccatcgg tgatgtcggc gatataggcg ccagcaaccg cacctgtggc
6961 gccggtg
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0581/pEGFP-IL10人源基因质粒 |
| P0590/pCDNA3.1-V5-FLAG-USP22人源基因质粒 |
| P0512/FUW-tetO-hKLF4人源基因质粒 |
| P0513/pMXs-hc-MYC人源基因质粒 |
| P0514/FUW-tetO-hSOX2人源基因质粒 |
| P0515/pMXs-hKLF4人源基因质粒 |
| P0516/pMXs-hOCT3/4人源基因质粒 |
| P0517/OKSIM人源基因质粒 |
| P0518/FUW-tetO-hOCT4人源基因质粒 |
| P0519/pLenti6/UbC/mSlc7a1人源基因质粒 |
| P0520/FUW-tetO-hMYC人源基因质粒 |
| P0521/FUW-M2rtTA人源基因质粒 |
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验相关实验
查、基因筛选及图位克隆有益基因的最好材料，也是永久保存基因资源的最好方法之一。 至于作用就太多了，你自己google一下，发现的是你好多做不了，而不是不知道怎么做？ huangyuan62 楼主,请问能交换你的BAC质粒吗？pBACe3.6,pBeloBAC11等都可以。 本人有以下质粒和菌种,可全部用于交换 pET28a,pET32a,pETDsb,pETGST,pETTrx，pTrc—CKS, pGEX4T
shinesnowing 想构建一个能通过接合作用进入野生型弧菌并在其中表达外源基因的质粒，现在找到一个名为pBOR8的质粒，只有质粒简图，没找到全序列，质粒上的元件为ori R6K、mob RP4、Ap、lacIq，如下图: 现有两个问题想请教各位高人 （1）该质粒能否直接作为表达载体，将外源基因克隆到该质粒上，如果可以通常外源基因应该克隆到哪个位点？ （2）如果不能直接进行外源基因克隆和表达，那么应该
分，一是未稳定整合的，一是稳定整合的，所以开始时亮度要高。 2.为什么筛选后单克隆无荧光：首先，经过G418筛选，外源质粒不能整合入染色体的细胞死亡；其次，稳定整合的细胞外源质粒整合的位置存在位置效应，即整合于不利于外源基因表达的位置，从而使外源基因沉默；第三，我不知道你的质粒中是否加入了核糖体进入位点序列，如果有的话，研究显示该位点前后的基因表达水平存在不同，可以查查相关文献 3.有无好的办法：我认为没有，稳定转染筛选时有运气的成分，假如外源质粒恰好整合到了利于表达的染色体部位，这时筛
pET28a-hpKM1人源基因质粒
￥100 - 1000
