CHIP 实验一直没有结果:通常用于超声体积是300 ul,然后取10 ul直接用于Input的处理,如处理前用TE增加体积至200 ul,再加RNase A和Proteinase K处理,并进行Reverse cross-link,再提取DNA,此时体积通常定为200 ul。PCR时,可取1 ul。
发表于2008-07-10 07:50
个人总结的成败因素:1有效裂解细胞; 2恰当选择处理样本的方式; 3选用适当适量抗体; 4恰当设置对照; 5不要过分交联DNA-蛋白质; 6交联所用的甲醛终浓度约为1% ,交联时问需要预实验来确定; 7 注意PCR策略。
发表于2007-12-05 17:48
jiachengyou2007: 染色质免疫共沉淀-芯片简介
染色质免疫共沉淀-芯片(Chromatin Immunoprecipitation –chip,ChIP-chip),它的基本原理是在生理状态下把细胞内的蛋白质和DNA交联在一起,超声波将其打碎为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过所要研究的目的蛋白质特异性抗体沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,通过对目的片断的纯化与检测,从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。
发表于2009-04-10 14:30
做ChIP(Chromatin Immunoprecipitation)几个月,时间不长,但深刻体会细节决定成败,把自己认为值得注意的细节总结。
发表于2009-08-10 23:12