标签: PCR技术
PCR技术可用于:(1)基因克隆及分子生物学研究;(2)微生物检测;(3)临床医学、微生物学等。
54 收藏 3318 阅读
PCR是在模板DNA、引物和dNTPs的存在下依赖于DNA聚合酶的酶促反应。PCR技术的特异性取决于引物和模板结合的特异性。反应分为变性、退火、延伸三步,经过一定的循环,介于两个引物之间的特异DNA片段得到大量扩增。
1. PCR只需几个DNA分子作模板就可大量扩增,应注意防止反应体系被痕量DNA模板污染和交叉污染,这是造成假阳性最大的可能。
2. DNA处理最好用硅烷化塑料管以防粘附在管壁上,所有缓冲液吸头、离心管等用前必须高压处理,常规消耗用品用后作一次性处理,避免反复使用造成污染。
3. PCR在超净台内进行,操作前后紫外灯消毒。超净台内设内供PCR用微量离心机、一次性手套、整套移液器和其它必须品;移液品用一次性吸头和活塞的正向排液器,防止移液器基部污染。
4. PCR操作应戴手套并勤于更换。
5. 成套试剂,小量分装,专一保存,防止它用。配制试剂用新器具,用后作一次性处理。
6. 试剂管用前先瞬时离心(10s),使液体沉于管底,减少污染手套与加样器机会。
7. 最后加模板DNA(包括在石蜡油后),马上盖好,混匀,瞬时离心(10s),使水相与有机相分开。加入模板且忌喷雾污染,所有非即用管都应盖严。加模板DNA后应更换手套。
8. 实验设阳性、阴性对照。
同一特异不同退火温度的PCR 如何确定最佳温度
不同退火温度跑的胶与最佳退火温度跑的胶有何区别 求助 谢谢
2 评论
PCR阴性对照有条带,还可以酶切么?对酶切有什么影响?
1 评论
关于家兔miRNA测序时样本选择的问题
最近刚开始做一个家兔miRNA在不同运动条件下差异性表达的课题,在选择试验样本时遇到了一点困惑。刚开始我是准备采集兔子尿液提取其中的miRNA进行测序,咨询了一下公司说是不建议用尿液作为样品,因为其中的miRNA含量少,不容易富集。我看文献时发现有用人的尿液做相关研究的,难道是因为人尿和动物尿有什么区别,所以人尿可以做,动物尿不能做。不知道有没有人能解答一下我的困惑,谢谢!
更有优质直播、研选好物、福利活动等你来!
本网站所有注明“来源:丁香园”的文字、图片和音视频资料,版权均属于丁香园所有,非经授权,任何媒体、网站或个人不得转载,授权转载时须注明“来源:丁香园”。本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的,且明确注明来源和作者,不希望被转载的媒体或个人可与我们联系,我们将立即进行删除处理。
LANCETR-FRET 技术
Revvity
金牌会员 入驻 7 年
其他电生理技术
威斯腾生物
金牌会员 入驻 14 年
细胞类技术服务
上海中乔新舟生物科技有限公司
钻石会员 入驻 15 年
一站式CRO技术服务
北京义翘神州科技股份有限公司(Sino Biological Inc.)
金牌会员 入驻 16 年
外泌体研究技术服务
上海宇玫博生物科技有限公司
金牌会员 入驻 9 年
沃特世采用SPE在线技术的UPLC
沃特世科技(上海)有限公司
金牌会员 入驻 13 年
我的询价
询价列表
暂时没有已询价产品
手机验证
科研好物关注研选号