做了几次RT-PCR然后进行核酸电泳,结果6个样本的内参GAPDH老是多出现一条带,这是咋回事?引物浓度10U=uM/uL,25ul反应体系中加1uL。其他目的基因的引物也是这样加的。反应条件:94,3MIN;94,30S;58,30S,75,30S,75,5MIN。谢谢
看了你的图,前1-6泳道为一个基因,7-12泳道为另一个基因,13-18泳道应该是内参,内参泳道在图中应该是3个条带,可能是内参扩增时设计的引物不特异,引物自身有二聚体形成,或扩增反应循环数太大,另外可能是系统内有污染?
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