我做的ELISA没有试剂盒,都是自己包板封闭孵育。做了很长时间,标准曲线的梯度都不好。刚加完显色剂的时候梯度还算明显,但是显色比较浅,随着时间延长(大概6、7分钟)以后梯度就不明显了。终止反应后测得的值梯度就没有了。求助各位大神!
最好用排枪同时加显色液,样品浓度太高,都饱和了
1、刚加完显色剂时梯度明显:显色液是不是从高浓度向低浓度孔加的啊,哈哈。2、是不是酶浓度太高,导致最后显色结果都是高的3、包被-酶标系统不匹配或者酶标的非特异反应太强,或者酶标仪读数范围不够,或者干脆酶标仪坏了4、样本中有能够催化底物的物质,没洗下来。5、建议:包被、酶标重新做梯度,先用较低的浓度把梯度摸索好,然后再优化灵敏度,最后调出所需的灵敏度、线性范围6、有条件的话,可以把酶免的蛋白系统移植到板式化学发光上,加完底物三分钟读数,这样可能比较适合你。7、蛋白系统灵敏度够的话,显色十分钟就差不多了。8、酶是自己标的么,见过有人把酶给标坏了出现这种情况的,HRP的话,比例不要太高,酶挂的太多了也不好的。
试试不同的H2SO4浓度,或者其他的酸。
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