关键词: 免疫荧光技术 基本原理
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最大吸引光波长为550nm,最大发射光波长为620nm,呈橙红色荧光。与FITC的翠绿色荧光对比鲜明,可配合用于双重标记或对比染色。其异硫氰基可与蛋白质结合,但荧光效率较低。
(2)其他荧光物质 1)酶作用后产生荧光的物质某些化合物本身无荧光效应,一旦经酶作用便形成具有强荧光的物质。例如4-甲基伞酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基伞酮,后者可发出荧光,激发光波长为360nm,发射光波长为450nm。其他如碱性酸酶的底物4-甲基伞酮磷酸盐和辣根过氧化物酶的底物对羟基苯乙酸等。 2)镧系螯合物某些3价稀土镧系元素如铕(Eu3+)、铽(Tb3+ )、铈(Ce3+ )等的螯合物经激发后也可发射特征性的荧光,其中以Eu3+应用最广。 Eu3+螯合物的激发光波长范围宽,发射光波长范围窄,荧光衰变时间长,最适合用于分辨荧光免疫测定。
(3)常见荧光素: 1)FITC 2)RB200 3)TRITC2 4)镧系:Eu3+、Tb3+ 5)PE 6)其它 常见荧光素的特性: 1)FITC:黄色结晶粉末,吸收光:490~495nm,发射光:520~530nm,明亮的黄绿色荧光。 2)RB200: 橘红色粉末, 吸收光570nm,发射光 595~600nm,橘红色荧光。 3)TRITC: 紫红色粉末,吸收550nm,发射光 620nm,橙红色荧光。 4)镧系:Eu3+、Tb3+ 5)PE:吸收光490~560nm,发射光 595nm,红色荧光。 6)其它:酶作用后产生荧光物质。 酶作用后产生荧光物质:
(4)合适荧光素的选择 1)具有与蛋白质形成共价键的化学基团。
2)荧光效率高,标记后下降不明显。 3)荧光色泽与背景色泽对比鲜明。 4)标记后能保持生物学活性和免疫活性 5)标记方法简单、快速。 6)安全无毒。
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