关键词: 慢病毒 应用 病毒载体 载体构建
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2. 三质粒表达系统
三质粒表达系统包括包装质粒、包膜蛋白质粒和转移质粒。其中包装质粒在 CMV 启动子的控制下,表达 HIV 21 复制所需的全部反式激活蛋白,但不产生病毒包膜蛋白及辅助蛋白 vpu;包膜蛋白质粒编码水泡性口炎病毒 G 蛋白 (V SV 2G),应用 VSV 2G 包膜的假构型慢病毒载体扩大了载体的靶细胞嗜性范围,而且增加了载体的稳定性,允许通过高速离心对载体进行浓缩,提高了滴度; 转移质粒中除含有包装、逆转录及整合所需的顺式序列,还保留 350 bp 的 gag 和 RRE,并在其中插入目的基因或标志基因 ( 绿色荧光蛋白 GFP) 。将载体系统分成三个质粒最大的益处是使序列重叠的机会大大减少,减少载体重组过程中产生 RCV 的可能性。通过三质粒共转染 293T 细胞,超速离心后病毒滴度可达 109IU /m l 。
3. 四质粒表达系统
为了减少 HIV 21 包装结构的序列同源性,进一步减少重组成 RCV 的可能性,Dull 等人将辅助基因去除。但由于 gag2pol 的转运需要 rev,因此,在上述的三质粒系统的基础上,构建成四质粒表达系统,该系统加上含 rev 的质粒减少了产生 RCV 的可能性,而且对非分裂期细胞转导效率无影响。
五、慢病毒载体应用
1. 将目的基因 /RNAi 基因转入难以转染的细胞,比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞;
2. 将目的基因 /RNAi 基因转入动物组织,以期获得长期表达;
3. 构建稳定表达目的蛋白 /RNAi 的细胞系,再用exvivo的方法导入动物体内;
4. 基因治疗;
5. 转基因动物;
6. 基因敲除;
7. 药物研究:构建表达受体蛋白的细胞系,研究药物的作用;
8. 快速建立生产目的蛋白的细胞系,非常有前途的真核细胞表达方法。
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分不出病毒的原因
我用SPF鸡胚培养病毒,结果老是分不出来,这是什么原因?楼主能不能帮我分析一下,感激不尽。
2 评论
豆辩实验大肠菌群
我想去学但我不憧怎么快速学
1 评论
高密度发酵与目的产物之间的关系如何
如题,我认为,对于表达蛋白分子量大的,可能OD上去就相对难点,请问各位这种理解是否正确?如何设计实验?
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