关键词: cell thawing
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Freezing Cells : Cells should be growing well or known to be in log phase Count, collect and pellet cells in a 15mL test tube Resuspend in freezing media so that the concentration is no more than 5x10^6 cells/mL of cold freezing media Transfer 1mL of cells to appropriately labelled cryovials and maintain on ice for approximately 30minutes Transfer vials to -80C freezer for 24hrs Transfer to liquid nitrogen dewar or -140C freezer for long-term storage. Freezing media 10% DMSO 90% FCS you'll need 1mL per 5x10^6 cells Thawing Cells : Remove vial from Liquid Nitrogen or -140C freezer and immediately transfer to 37C water bath While holding the tip of the vial, gently agitate the vial, being careful hnot to allow water to penetrate the cap or seal When completely thawed, transfer contents of vial to 15mL test tube Slowly add 10mL warm complete media and spin at 1000g for 5min Decant media and resuspend pellet in a volume of complete media appropriate for flask or macrowell Transfer cells to flask or 24 well plate and incubate at 37C and 5%CO2 Cells can be checked visually or counted, beginning at approximately 1hr, for an estimate of viability. Immediate cell counts can be misleading
Freezing Cells :
Thawing Cells :
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你所在的学校的补助在全国是什么水平?
还记得你在读研时,所在学校的补助是多少吗~?读博的也可以说说呀。我的好少,有点想哭。
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科研汪也想有春天:告诉我你们的另一半都在哪里找的?
小伙伴们,请问你们的女(男)朋友是怎么找到的?(好给后来的朋友参考啊)是交友网站,还是七大姑八大姨介绍,还是同学自然成事?春天到了,我也想拥有一段甜甜的恋爱~看看你们可怜又可爱的小师弟小师妹吧!
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细胞污染
悬浮细胞复苏后培养2.3天会出现小黑点,在倒置显微镜第四挡可见细菌在活动。采用两次离心,然后加平时双倍量的抗生素,效果不佳。实验用的东西都重新高压灭菌了,培养液也重新过滤了,个人操作也更加注意了,但仍然在复苏后出现细菌,苦恼!!!
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