【实验技巧】台盼蓝染色
台盼蓝是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。机理 正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡,这与中性红作用相反。因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定 ...
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培养细胞常用固定剂和固定方法
培养细胞常用固定剂和固定方法 培养细胞常用固定剂有4%多聚甲醛磷酸缓冲液、丙酮、甲醇和95%乙醇。在固定之前需用37℃预热的PBS轻洗细胞。 1.4%多聚甲醛磷酸缓冲液 固定10―20分钟,干燥。 2.甲醇 10‰甲醇固定5―20分钟,自然干燥。 3.丙酮 4℃冷丙酮固定组织穿透性和脱水性强,抗原保存好,很少用于组织切片,常用于培养细胞和细胞涂片的固定,平时丙 ...
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过氧化物酶DAB法
过氧化物酶DAB法 过氧化物酶(peroxidase)与细胞色素氧化酶具有相似的化学本质,是一类氧化还原酶,可使过氧化氢(H2O2)分解生成水和释放氧。过氧化物酶广泛分布于乳腺、甲状腺、唾液腺、肠上皮、血细胞和肥大细胞等。存在于细胞过氧化物酶体中,是机体的抗氧化酶,在防止氧代谢物损伤中具有重要作用。显示过氧化物酶常用联苯胺法。联苯胺如DAB和四甲基联苯胺(3,3,5,5,―tetramet ...
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亲和素―生物素―过氧化物酶复合物法
亲和素―生物素―过氧化物酶复合物法 亲和素―生物素―过氧化物酶复合物法(avidin-biotin-pcroxidase complex methodABC法)的特点是将亲和素作为“桥"与生物素化的抗体和生物素结合的酶连接起来,使抗原与抗体反应信号放大,以增加敏感性。由于该法是以物质对某种组织成分具有高度亲和力为基础,一方面区别于古老的组织化学分解、置换、氧化和还原反应,另一方面本质上又是 ...
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