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问:
我要做LUCIFERASE 了,可是我一点概念都没有。有哪位有具体的操作PROTOCOL?
还有一些白痴问题luciferase 要检测什么呢?是把我的带有LUC的质粒转染到细胞里,然后检测它的活性?什么意思啊?
我检测它的目的是什么呢?我只知道我现在有一个LUC的质粒,老板让我准备做,我都不知道是什么目的和思路......
谢谢啦
答:
luciferase检测的是虫荧光素酶基因的表达情况,一般我们构建luciferase载体的时候是把待研究的基因装在luciferase基因的前面,从而以luciferase的表达来了解目的基因的表达情况。
至于具体的PROTOCOL,因为不了解你的实验以及细胞情况,比较难说,而且各种luciferase检测试剂也不一样。我们实验室做的是共转染构建的一段基因启动子区的luciferase表达载体和目的质粒,从而初步研究目的基因对于该启动子的作用。具体步骤:共转染至少80%汇片的贴壁细胞,然后48H把细胞消化下来,按照luciferase检测试剂的说明书上机检测。
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你所在的学校的补助在全国是什么水平?
还记得你在读研时,所在学校的补助是多少吗~?读博的也可以说说呀。我的好少,有点想哭。
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科研汪也想有春天:告诉我你们的另一半都在哪里找的?
小伙伴们,请问你们的女(男)朋友是怎么找到的?(好给后来的朋友参考啊)是交友网站,还是七大姑八大姨介绍,还是同学自然成事?春天到了,我也想拥有一段甜甜的恋爱~看看你们可怜又可爱的小师弟小师妹吧!
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细胞污染
悬浮细胞复苏后培养2.3天会出现小黑点,在倒置显微镜第四挡可见细菌在活动。采用两次离心,然后加平时双倍量的抗生素,效果不佳。实验用的东西都重新高压灭菌了,培养液也重新过滤了,个人操作也更加注意了,但仍然在复苏后出现细菌,苦恼!!!
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Thermo,T9005,OBS-Protocol Luciferase
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