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feiniao2005038:测序本人拿菌液让生工测序,结果是双峰,是什么意思?怎么回事?重组的质粒用酶切鉴定没有问题,
丁香园网友zhaochengling认为:
1.有可能是基因重复,重复的两个拷贝之间有一个硷基的差异
样品本身被污染,这常常发生在样品为质粒和菌液的情况中。当使用通用引物测序时,如果刚好和样品中的几个质粒均能结合,那么就会出现这种情况,而且在同一位置上还可能有不止两个峰形;
2.测序出现双峰(套峰)要根据具体情况来判断可能造成原因:
1)是单个碱基套峰还是很多,
2)是开始就套峰还是从某一特定位置(譬如插入位点)开始套峰。如果是单个碱基套峰,可能不是单克隆,也可能质粒在自己复制是就产生两中碱基;很多碱基套峰如果是开始就套峰,很可能是测序引物选择不好,不具有特异性,如果是在特定位置(譬如插入位点)开始套峰,非单克隆可能性很大。
具体情况具体对待,不看到测序实际情况,单凭以上你的描述,很难发现你的sample问题所在。
3.不是一种克隆菌,需要从新划板,挑取单个菌落培养再测序.
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你所在的学校的补助在全国是什么水平?
还记得你在读研时,所在学校的补助是多少吗~?读博的也可以说说呀。我的好少,有点想哭。
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科研汪也想有春天:告诉我你们的另一半都在哪里找的?
小伙伴们,请问你们的女(男)朋友是怎么找到的?(好给后来的朋友参考啊)是交友网站,还是七大姑八大姨介绍,还是同学自然成事?春天到了,我也想拥有一段甜甜的恋爱~看看你们可怜又可爱的小师弟小师妹吧!
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细胞污染
悬浮细胞复苏后培养2.3天会出现小黑点,在倒置显微镜第四挡可见细菌在活动。采用两次离心,然后加平时双倍量的抗生素,效果不佳。实验用的东西都重新高压灭菌了,培养液也重新过滤了,个人操作也更加注意了,但仍然在复苏后出现细菌,苦恼!!!
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菌液测序
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