关键词: 生物学 Percoll Ficoll 密度梯度 病毒
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自从1977 年推出以来,二氧化硅胶体PercollTM已经成为全世界数以千计的研究人员对密度梯度介质的选择。其近乎完美的物理特征方便它在细胞、细胞器、病毒和其他亚细胞颗粒分离中的使用。Percoll做为第一步在进行更高分辨率分离或核酸抽提前富集细胞是非常有用的。人们会认识到在进行其他的这些方法前使用Percoll 做为第一步可以节省大量的时间和资源。
对于生物学颗粒,理想的梯度培养基被描述为具有以下特征:
不影响分析程序
Percoll在现有的介质中是非常特殊的,它符合上述所有的标准,并且提供以下附加的优点:
密度梯度离心原理
当颗粒悬浮液被离心时,颗粒的沉降速率和应用的离心力是成比例的。溶液的物理性质也会影响沉降速率。在一个固定的离心力和液体粘度下,沉降速率和颗粒大小以及它自身密度与周围介质密度之间的差别成比例。
在一个离心范围中一个球体的沉降方程为:
这里v = 沉降速率d = 颗粒直径(流体力学等效球体)pp= 颗粒密度p1 = 液体密度h= 介质粘度g = 离心力从这个方程中,可以观察到下列关系:
沉降速率随着离心力的增加而增加。
通过密度分离(等密度离心法)
在这个技术中,梯度介质的密度范围包含了样品颗粒的所有密度。每种颗粒将沉降到梯度中的平衡位置,在这个位置梯度密度等于颗粒密度(等密度位置)。因此,在此类分离中,颗粒基于不同的密度而被单独分离,与颗粒大小无关。 注释: 当考虑生物学颗粒时,切记介质的渗透压能够明显地改变膜结合颗粒的大小和表观浮力密度。一个高的渗透压能够导致膜结合颗粒收缩而培养基低的渗透压将导致结合颗粒的膨胀。
通过大小分离(速率区带离心法)
在这类技术中,颗粒之间的大小差别与颗粒的密度一起影响分离。正如上述的方程所示,大颗在整个梯度中比小颗粒移动更快,因此选择密度范围以便在整个分离期间的所有的位置上的颗粒密度大于介质密度(图1)。被分离的区带到达管底部(或者它们的平衡位置) 之前运行被终止。
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你所在的学校的补助在全国是什么水平?
还记得你在读研时,所在学校的补助是多少吗~?读博的也可以说说呀。我的好少,有点想哭。
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科研汪也想有春天:告诉我你们的另一半都在哪里找的?
小伙伴们,请问你们的女(男)朋友是怎么找到的?(好给后来的朋友参考啊)是交友网站,还是七大姑八大姨介绍,还是同学自然成事?春天到了,我也想拥有一段甜甜的恋爱~看看你们可怜又可爱的小师弟小师妹吧!
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细胞污染
悬浮细胞复苏后培养2.3天会出现小黑点,在倒置显微镜第四挡可见细菌在活动。采用两次离心,然后加平时双倍量的抗生素,效果不佳。实验用的东西都重新高压灭菌了,培养液也重新过滤了,个人操作也更加注意了,但仍然在复苏后出现细菌,苦恼!!!
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