关键词: PC12细胞 消化 聚集成团 MTT 检测指标
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PC12传代的消化
丁香园wangpengljr的问题:
我最近养PC12细胞做分化方面的研究,但是遇到的难题是PC12细胞本身的贴壁能力就差(养PC12细胞最好是用Gibco的马血清,Hyclone的不贴壁!),最开始没有用胰酶处理,直接吹打下细胞发现成团现象,用0.02%EDTA的PBS吹打似乎不易成团,但是慢慢地细胞贴壁能力下降了,我用poly-Lys包被都不行。我之所以不用胰酶是因为怕胰酶的处理会影响我以后的NGF诱导分化的实验,难道非得要我用胰酶吗??那么该用多大浓度合适呢?
丁香园yaya0011的回答:
这个细胞我正在养,一开始养的也不好,不容易贴壁,现在可健康了^_^ 因为细胞是从其他lab拿来的,所以我用的条件不是atcc上说得那个,我用6%fbs和6%马血清加dmem养,全部都是Gibco的。
培养条件试了很多,最后发现7。5%co2 是最好的。你可以试试。当然5%也可以,但是长得慢,所以我最后选了7。5,一般3天subculture。
加马血清似乎是因为里面有某种fbs中没有的营养物质,总之一定要加!
用trypsin后PC12会不健康,所以有二个办法。1。每次用完trypsin后1000rpm离心3min。将trypsin吸走。2。每次subcuture时候不用trypsin,和PBS,直接用medium把贴壁的细胞吹下来吹成单个的再长。我用的是后面一种,效果非常好。细胞很健康!
PC12健康与否的判断方法(是我自己总结的):
没有加NGF时,如果细胞很健康,会长出很短的小轴突,整体圆圆的,很可爱。 当它不健康时,你会发现,1,细胞不易贴壁了,会漂很多。2。细胞会呈现椭圆形,轴突变长(这时的细胞其实状态已经不好了,即使贴壁也不行!)
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还记得你在读研时,所在学校的补助是多少吗~?读博的也可以说说呀。我的好少,有点想哭。
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科研汪也想有春天:告诉我你们的另一半都在哪里找的?
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细胞污染
悬浮细胞复苏后培养2.3天会出现小黑点,在倒置显微镜第四挡可见细菌在活动。采用两次离心,然后加平时双倍量的抗生素,效果不佳。实验用的东西都重新高压灭菌了,培养液也重新过滤了,个人操作也更加注意了,但仍然在复苏后出现细菌,苦恼!!!
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