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悬浮细胞培养方法求心得

关键词: 悬浮细胞 培养方法 细胞状态 2008-07-16 00:00 来源:互联网 点击次数:15121

悬浮细胞一般几天离心一次,觉得好难养啊!求心得?

丁香园网友goingba认为:你养的是什么细胞,原代吗?我觉得悬浮细胞最好养了,不用消化,关于几天离一次心,要看你的细胞生长状态了,我养过血液肿瘤细胞,增值比较快,我一般是第二天半量换液(加等量培养基后一分二),第三天若长得比较满,就离心换液。若你不想每天都去管它,你可以把细胞密度中的相对稀一点(不能太稀,太细了细胞不好好长),可以2-3天换一次液(半量,不用离心),这要看细胞状态,和你试验进度,若你急着用细胞,那就将细胞中密一点,天天换液,用胎牛血清,这样细胞会疯长的。要是比较娇气的细胞,象RPMI-8226,一定要用胎牛血清,2-3天半量换液,依据细胞状态再离心换液,等细胞进入对数生长期了,养起来也就好养了。若是正常人T细胞,也要3-5天换一次液,最好3天的时候加入些新培养基,我曾经有一次1周忘了换液(因为T细胞增殖很慢,或者说在体外不给刺激基本不增殖,所以培养基的颜色不发生改变,但它也消耗营养),最后作流式发现细胞大部分凋亡和死亡了。

我养的是JURKAT,细胞状态不太好,都给他吃20%胎牛血清了,听说这细胞挺好样,可能刚复苏不好养,长得不好啊。

丁香园网友goingba认为:我倒没养过你这株细胞,20%胎牛血清稍微有点高,刚复苏出来细胞状态不太好很正常,这是你换液不要太勤,你可以刚种的时候加的培养基少一点,往后几天,每天加一点新鲜的进去。这个时候一点要注意你的培养的放置的时间,若在4度超过了2周,一定要加L-谷氨酰胺,我有一会就是刚开始细胞老是长的不太好,后来加了点谷氨酰胺,状态立马变了!也许我的细胞是赶巧了,马上要好了正碰上我加谷氨酰胺,你的若实在长不好,也可以试一试!

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