Native-PAGE实验方法
非变性聚丙烯酰胺凝胶和变性sds-page电泳在操作上基本上是相同的,只是非变性聚丙烯酰胺凝胶的配制和电泳缓冲液中不能含有变性剂如SDS等。一般蛋白进行非变性凝胶电泳要先分清是碱性还是酸性蛋白。分离碱性蛋白时候,要利用低pH凝胶系统,分离酸性蛋白时候,要利用高pH凝胶系统。酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的pH是8.8的缓冲系统,蛋白会带负电荷,蛋白会相阳极移动;而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境 ...
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Native-PAGE和SDS-PAGE的比较
非变性凝胶电泳,也称为天然凝胶电泳,与非变性凝胶电泳最大的区别就在于蛋白在电泳过程中和电泳后都不会变性。最主要的有以下几点:1. 凝胶的配置中非变性凝胶不能加入SDS,而变性凝胶的有SDS。2. 电泳载样缓冲液中非变性凝胶的不仅没有SDS,也没有巯基乙醇。3. 在非变性凝胶中蛋白质的分离取决于它所带的电荷以及分子大小,不像SDS-PAGE电泳中蛋白质分离只与其分子量有关。4. 非变性凝胶电 ...
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Native-PAGE常见问题分析
1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳时预电泳是怎么回事的?预电泳时要加6×DNA上样缓冲液吗?电泳1-2小时再加结合反应产物吗?预电泳是除去凝胶中没有聚合的单体和双体和聚合引发剂,提高分辨率,不加任何物质,一般30-60分钟后加样电泳。2. 银染的步骤是什么?银染的关键因素是什么?步骤是:(1) 固定:10%冰乙酸30min。(2) 清洗:双蒸水冲洗凝胶2次,每次1min。(3) ...
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蛋白质凝胶电泳凝胶的制备
蛋白质凝胶电泳凝胶的制备【材料与试剂】(1)30%的丙烯酰胺:分别称取29g 丙烯酰胺,1g NN-亚甲双丙烯酰胺加温热的去离子水60ml,加热至37℃溶解,补加水至终体积为100ml过滤,即配成30%(w/v)丙烯酰胺贮存溶液。丙烯酰胺和双丙烯酰胺在贮存过程中缓慢转变为丙烯酸和双丙烯酸,这一脱氨基反应是光催化或碱催化,故溶液的pH值不超过7.0,应置于棕色瓶中4℃保存。(2)10%十二烷基硫酸 ...
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