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IV. BUFFER COMPOSITION AND VENDOR INFORMATION
2X Polymerase mix
287μlddH2 0
100μl10X Boehringer M. transcription buffer
50μl10X dig-NTP mix
13μlRNase inhibitor (500U)
50μlT3 or T7 RNA polymerase (1000U)
500μlTotal Volume
10X dig NTP mix
25.0μl10mM digoxigenin UTP
4.5μl100mM UTP
7.0μl100mM CTP
7.0μl100mM GTP
7.0μl100mM ATP
19.5μlddH2 O
70.0μlTotal Volume
10X DNase I Buffer
0.2M Tris pH 8
0.1M MgCl2
DNase I mix
700μlddH2 O
100μl0.1M DTT
100μl10X DNaseI Buffer
100μlDNase I (100U, RNase-free)
1ml Total Volume
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RNA抽提后出现奇怪情况
按步骤用50mg的小鼠肝脏提取总RNA,用预冷的研钵和-70度保存的trizol共研磨组织,氯仿分层,异丙醇沉淀,75%乙醇洗一遍,风干后depc水溶解沉淀,1.5%的琼脂糖电泳220V,20min,结果图如下,各位大神能帮我看看是什么情况吗?
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siRNA转染后目的蛋白没有减低是为什么?
我想用siRNA抑制DMT1,在吉马公司买了三个siRNA,我用的是lipo2000转染,转染前饥饿2h,转染6小时,后换成完全培养基48小时,对照使用转染GAPDH做的,接下来WB检测DMT1,却没有观察到目的蛋白的下降,请问有人遇到过相似的情况吗?应该怎么解决。
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最后溶解样品用DEOC水的量
师兄师姐好,我第一次做提取RNA的实验,不知道最后用DEPC水溶解样品时,用多少的DEPC水呢?
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