做动物实验,最先要做的事情就是要养好动物。掌握好动物饲料、饮水及其生活环境,这对于动物实验的成功是最基本的保证。
这是看似一个平常,但却有着不少细节的问题。为了本版广大站友能在整体上提高对实验动物饲养的认识,做好动物实验的第一步,特此开设本贴讨论动物饲养的问题。希望大家能踊跃参与,以更多的实例来充实、丰富本贴。
实验动物的饮水
实验动物的笼具
实验动物的垫料实验动物如何选择?这个问题对于药理和实验动物专业的朋友来说,不是难事。但对于需要做动物实验的其它专业的朋友来说,有时候会感到茫然。或者没有自己的思考,照抄别人的做法。
对于这一部分站友,我们不可能要求去系统学习《医学实验动物学》,但我们可以常备一本在身边。在需要用的时候翻一翻,将会使你豁然开朗。因为书中比较详细地介绍了常用实验动物的解剖生理、生物学习性等等,最主要的是它为你选择什么样的实验动物提供了重要的参考。
第一,做什么样的实验?什么动物适合本实验?做什么实验,这是选题时就确定好了的。肯定是经过论证的。无需多讲。用什么样的动物呢?我想,大多是参照文献,再结合自己对实验动物的了解。选题之时就肯定阅读过很多文献了,因此不会陌生。
如:做高血脂、动脉粥样硬化,我想大多数人会选择大鼠、兔子,也可以选金黄地鼠、鹌鹑,少数人会选小鼠,但我想用狗和猴的基本上不会有吧。因为要选择比较容易形成此疾病的动物,且要易得。
所以,对于不太熟悉的人来说,要多看文献,参考别人是如何选择的。就算是对动物比较了解,系统学过这方面知识的,也要多看文献,综合权衡。切忌随意地凭空想像。
第二,采取什么样的方法造模?做动物实验通常是要造模的。选择什么样的方式?这要从实验的目的及条件入手。造糖尿病,可以用手术,也可以用药物。其中药物有四氧嘧啶及链脲佐菌素(STZ)。后者用得较多,且为国际认同。
而四氧嘧啶目前用得较少了。造模方法一是参照《药理实验方法学》,二是参照文献。造模方法有时也决定了你的动物选择。像做手术造动脉粥样硬化,我想用大鼠比小鼠来得方便吧?
第三,经费承受能力如何?做实验也要精打细算。不可能为了所谓的高水平、高端技术而不顾实验室的条件。像做高脂动物模型,假设经费只有一万多元,一定要弄个敲除APoE基因的小鼠来做,恐怕没人认同。做一个简单的镇痛抗炎实验,你非得要用SPF实验室,这也是不太实际的,也是没必要的。
就像一个刚刚能满足温饱的人突然要花上很多钱去国外旅游一样,是不切实际的。因此,实验经费让我们有时不能达到理想的状态。
但是,科研并不一定是要用高端的技术、高级的动物,而是要能解决问题。能用简单的技术、普通的动物解决问题的,就不必去盲目追求更高。过于理想化、不考虑经费问题,是不少研究生初涉实验时的通病。
辨雌雄的目的就是为了分笼饲养,避免雌雄同笼而交配,无法进行实验。不过,即使是同性的放在一笼,有些细节仍值得注意。说一个小插曲:本人有一次将两批做实验剩下的小鼠弄到一个笼里。结果发现大的小鼠不断追逐小的小鼠,且试图交配。
一师妹在旁说,是不是我弄了只雌的进去了?我仔细检查了一下,根本没有弄错。放回去,过了一会儿又发现如此现象。后来我想可能是因为大的小鼠(25g~30g)已完全性成熟,在找不到雌性的情况下来追小的雄性小鼠(15g~18g)以获得性的满足。
这岂不成了“同性恋”?因此,动物的日龄相差太大的不要放在同一个笼里,以免发生上述现象。当然,一般而言,一个笼子养多个动物的主要是小鼠、大鼠、豚鼠、金黄地鼠等小动物,像兔子、狗一般都是一个笼子一只。刚开始一定要认真仔细地观察,这样会有一些经验。
熟悉以后,可以很迅速很准确的分出来。对初学者而言,我建议用第2种方法予以确认。一般提供商将动物送来时,都是已经分好了雌雄的。但我们仍要亲自进行确认。一旦有一只混入异性群中,可能给实验带来极大的影响,甚至前功尽弃。
二是豚鼠、兔子的饲料。以苜蓿、玉米、大豆、麸皮、鱼粉为主,辅以复合维生素、骨粉、微量元素。与小鼠、大鼠的饲料相比,主要是苜蓿的比例达到了40%左右。一般做成细长圆柱形。或曰细棒形。直径在0.3cm左右。颜色呈带一点斑驳的青色。
豚鼠、兔子的饲料成份基本一样,只是比例略有不同,一般可以共用。因二者不能自身合成维生素C,所以苜蓿粉的比例较大。但,饲料是加水润湿后,经高温高压而制成,维C及酶类等已部分破坏。豚鼠、兔子饲料不是全价饲料。
因此,在饲料之外,仍要加少许青菜或青草,否则有的状态不佳甚至死亡。本人也曾用在饮水中加维C片的方法,但效果似不如直接给予青菜。
制法:胆固醇鳞片状,研细;丙基研细;二者充分混合。取鸡蛋煮熟,剥取蛋黄,捏碎,吹干,研成细粉,与前二者混合好。如要加胆酸盐、维生素D3,亦将其混合好。然后以“等量递增法”将上述药料加入到普通饲料粉末中。
再将猪油化开,喷洒在饲料粉末之中混匀。混好之后喷适量水为黏合剂,加到制粒机中制成棒状饲料。
在此,特别提出“等量倍增法”。因上述造模药料与普通饲料的量相差悬殊,直接加入其中是难以混匀的。这样会造成以后动物摄入的造模的胆固醇,甘油三酯差异大,不利于实验。
所谓“等量递增法”就是:将上述药料入差不多相等的普通饲料粉末充分混匀;得混合物后,再加与此混合物相等量的普通饲料混合,充分混匀;如此类推。比如:药料为200g,第一次混合后即为400g,第二次混合后为800g…这样就成倍地混合好。
因此,又称为“等量倍增法”。因为相等量的不同物质混合时,相互混入对方的机率最大,最容易混匀。学过药剂的朋友们是非常熟悉的,这在中药的散剂中就是这样做的。没学过这个方法的朋友要特别关注。
目前有些饲料供应商称可以提供现成的高脂饲料。一则他们很多根本就是胡乱地加入其中的,极不均匀,严重影响实验。二则他们做的饲料中造模药的比例不一定符合你的要求。很少有人懂得“等量倍增法”的原理及实用价值。
因为目前饲料行业中专业人士多不会在一线,而是做管理工作。做饲料的多是没有专业知识,而只是稍加培训甚至没有培训的普通工人。当然,“等量倍增”的做法很简单,关键是要有这样的专业意识。做此饲料时,最好全程跟踪,这样才会对实验结果心中有数。
在此,我一而再,再而三地强调“等量倍增法”配制饲料,就是为了站友们减少在此类实验中的误差。因为,有人问我,为什么他们的高脂组有些动物的血脂几乎跟正常组没有显著差异,而有的又高很多,标准差如此地大?我第一时间想到的就是饲料的配制是否有问题。
如果饲料没配好,实验可能前功尽弃。因此,不厌其烦地说两句:高脂饲料要亲自配,且按要求、按科学规律配(等量倍增法)。饲料成形后,要摊开置通风处吹干,或以电风扇吹干。不要受热。在春夏之季,尤应注意。因其中含有脂肪油类,且因制饲料时要经过高温压制,放在一起易发热、生霉。
有人置冰箱保存,实不妥。一则冰箱容量有限;二则饲料中的水分未尽,出冰箱后,冰化,更易生霉,且动物不是太喜欢吃冷藏后的饲料。一次配制饲料不宜过多。一般可配实验全程所需饲料的一半。后半段根据前面所消耗的实际量来酌性增减。但需给足量,宁多一点,不能少。
高脂饲料比普通饲料要软,易碎。要注意轻拿轻放。底部碎屑可收集起来,再压制成型。
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