关键词: 原位杂交 探针 原理
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五、操作
(一) 脱蜡,水化:
1、 二甲苯10min 两次
2、 无水乙醇3min 两次
3、95%乙醇3min 一次
4、75%乙醇3min 一次
5、50%乙醇2min 一次
6、重蒸水2min 一次
7、PBS洗涤5min
(二) 将组织芯片放入去内源性酶液中浸泡30min;PBS洗涤5min
(三) 0.1M甘氨酸去游离醛基 15min;0.4%tritonX-100 洗10min;
(四) 用蛋白酶K与37℃孵育30min ,PBS振洗5min
(五) 在0.1mol/L三乙醇胺——0.25%乙酸酐中孵育10min ;在2×SSC中洗5min ;
(六) 滴加预杂交液42℃,30min;将RNA探针用预杂交液稀释(1ng/uL~2ng/uL)
(七) 杂交
1、在载玻片表面覆盖上杂交小室,加20~50uL的杂交液到组织芯片TMA上,42℃~44℃湿盒中过夜。
2、在4×SSC中37℃洗涤15min
3、2×SSC,加入RNA酶(大致为10ug/ml)37℃中洗涤30min,
4、0.5×SSC,37℃洗涤15min
(八)封闭
1、1%正常山羊血清孵育30min
2、用抗体稀释液稀释碱磷酶标记的抗地高辛抗体(1:500)37℃中孵育3h,PBS洗三次,每次5min
3、TSM1洗;
4、TSM2洗;
(九)显色:用TSM2将NBT/BCIP按2:1稀释进行显色;显微镜下掌握染色程度
(十)终止显色:用水终止
(十一)脱水,透明,封固
1、85%乙醇脱水,2min
2、95%乙醇脱水5min
3、无水乙醇脱水15min
4、二甲苯20min
5、封片,镜检
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小树洞:你们工作后第一个月都得了多少工资呢?
妇产专硕18年刚毕业,四证合一。找了个市级三甲医院,合同的。工作一个月,当时发工资,968元。之前应聘的时候说前三月试用期1300 元。试用期过后加奖金,没想到,呵呵,租房一月1000元。今天直接崩溃。打算明天打电话问财务扣的都是什么钱,了解清楚后闪人。回家继承祖业—烤地瓜,烤玉米走起。你们工作后第一个月都得多少工资呢?
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