关键词: 原位杂交
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(14)准备核酸探针混合物:使用预杂交缓冲液稀释探针,85℃加热5分钟,置于冰块中10分钟;
(15)杂交;第二天 (16)将玻片置于SSC中2次,每次5分钟以去除封片; (17)PBS清洗3分钟; (18)RNA酶A溶液中(或0.1-1 ng/ml PBS中),37℃孵育30分钟; (19)PBS清洗5分钟; (20)室温,2×SSC清洗10分钟; (21)37℃,1×SSC清洗10分钟; (22)37℃,0.5×SSC清洗10分钟; (23)缓冲液A孵育10分钟; (24)缓冲液A(1%正常绵羊血清和0.03%三重氢核X-100)孵育30分钟; (25)加入抗地高辛抗体(1/200的上述缓冲液,来自Boehringer Mannheim),37℃孵育3 小时; (26)缓冲液A清洗2次,每次10分钟; (27)缓冲液B清洗2次,每次5分钟; (28)制成NBT/BCIP暗处保存30~60分钟,显微镜下进行观察,如果背景尚佳,显色时间可延长到16小时; (29)停止缓冲液B的反应,用水进行简单的清洗; (30)固红,脱水以及封片进行核的复染。 2. 使用地高辛标记的寡核苷酸探针进行石蜡切片的原位DNA杂交第一天。 (1) 二甲苯于37℃脱蜡2次,每次15分钟; (2) 无水乙醇浸泡2次,每次5分钟; (3) 95%乙醇浸泡2次,每次5分钟;
(4) PBS清洗5分钟; (5) 2%焦碳酸二乙酯室温下浸泡10分钟; (6) PBS清洗5分钟; (7) 加入胃蛋白酶25 μl/ml,37℃孵育10分钟; (8) PBS清洗2次,每次5分钟; (9) 0.2N的HCl孵育30分钟; (10)PBS清洗2次,每次5分钟; (11)0.25%无水乙酸和0.1 M 三乙醇胺孵育10分钟;
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小树洞:你们工作后第一个月都得了多少工资呢?
妇产专硕18年刚毕业,四证合一。找了个市级三甲医院,合同的。工作一个月,当时发工资,968元。之前应聘的时候说前三月试用期1300 元。试用期过后加奖金,没想到,呵呵,租房一月1000元。今天直接崩溃。打算明天打电话问财务扣的都是什么钱,了解清楚后闪人。回家继承祖业—烤地瓜,烤玉米走起。你们工作后第一个月都得多少工资呢?
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抗体保存
用奶粉或者BSA配好的一抗/二抗可以在—20度保存多久?大约几个星期还是一两个月?
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DNA提取有杂带
PCR产物用试剂盒回收的时候,发现有杂带?有哪些办法可以提取得更干净?
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