标签: 糖类染色 免疫组织化学实验技术及应用 第十五章
糖的分类较为复杂,单糖和双糖易溶于水,所以在固定液中易被溶解。多糖又分为淀粉、纤维素和糖原。黏多糖通常分为中性黏多糖和酸性黏多糖。糖蛋白是多糖和蛋白质结合的复合物。根据染色目的,选用对应的染料和试剂,分别进行染色,可判明不同的组织形态结构,对于诊断与实验性研究,具有一定的实用意义。内容来源:《免疫组织化学实验技术及应用》
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糖原由多糖衍化而来,是单纯的多糖。糖原易溶于水,所以用特殊的 Carnoy 固定液或无水乙醇直接固定才能较好地保存糖原,常用高碘酸(periodic acid)-Shiff 反应(PAS)染色法。
高碘酸氧化液:高碘酸 0.5 g,蒸馏水 100 ml。此液溶解后放入冰箱中待用。
Schiff 染色液:碱性复红 1 g,1mol/L 盐酸 20 ml,焦亚硫酸钠(偏重亚硫酸钠)2 g,双重蒸馏水 200 ml。先将 200 ml 双重蒸馏水煮沸,稍有火焰,加入 1 g 碱性复红,再煮沸 1 min,冷却至 50℃ 加入 20 ml1mol/L 盐酸,待 35℃ 时加入 2 g 焦亚硫酸钠。室温中 2 h 之后见稍带红色,5 h 之后变为无色液体。棕色瓶内装好,放入冰箱中保存待用。
1. 石蜡组织切片,常规脱蜡至水。
2. 蒸馏水洗 2 次。
3. 高碘酸氧化液处理 10~20 min。
4. 充分蒸馏水洗。
5. Shciff 液染色,染色 10~20 min(如果室温在 15℃ 以下时,可在湿盒内加入温水而加快反应)。
6. 流水冲洗 3 min(对于着色较深的切片可适当缩短时间)。
7. 用 Mayer 明矾-苏木精液染细胞核 3~5 min。
8. 0.5% 盐酸乙醇液分化 30s,自来水浸洗 2 min。
9. 无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
1. 糖原固定必须及时取小块组织进行固定,防止固定不透或不均现象。
2. Schiff 试剂使用时的吸管要清洁,当室温较低需加热时,要注意染色不能较深,防止影响染色效果。
结果:糖原物质呈红色,细胞核呈蓝色。
阿尔辛蓝染色液:阿尔辛蓝 8 GS 1 g,冰醋酸 3 ml,蒸馏水 97 ml。用前过滤,在溶液中加入麝香草酚 2 粒防腐。pH 值为 2.6~3.00 之间。
2. 蒸馏水浸洗 1 min。
3. 3% 乙酸液处理 3 min。
4. 阿尔辛蓝染色液染色 30 min,蒸馏水洗 2 次。
5. 3% 乙酸液处理 1 min,蒸馏水洗 2 次。
6. 高碘酸氧化 10 min。
7. 自来水冲洗,蒸馏水浸洗 2 次。
8. 在 Schiff 染色液中染色 10~20 min(根据室温可适当延长或缩短时间)。
9. 自来水浸洗 2 min(不宜在水中停留时间过长,以免背景较深)。
10. 无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
1. 阿尔辛蓝染色液使用时不能摇动,防止污染组织切片。
2. 高碘酸氧化液不能存放时间较长,防止失去氧化效果。
结果:中性黏液物质呈红色,酸性黏液物质呈蓝色,中性和酸性黏液混合物质呈紫红色。
荧光桃红染色液:荧光桃红 1 g,蒸馏水 100 ml。
阿尔辛蓝乙酸液:阿尔辛蓝 0.5 g,0.5% 乙酸 100 ml。
2. 0.5% 乙酸液处理 2 min,阿尔辛蓝乙酸液处理 15 min。
3. 蒸馏水洗 2 次,荧光桃红染色液处理 5 min。
4. 用 Martins 黄(MY)染色液 30s 左右。
5. 直接用无水乙醇脱水,二甲苯透明和中性树胶封固。
1. Martius 黄(MY)染色液各成分(MY,0.5 g;95% 乙醇,98 ml;磷钨酸,2 g)混合后形成饱和液,再进行使用。
2. MY 染色液着色较快,注意切片上带有黄色。
结果:角化鳞状上皮呈红色,黏液物质呈蓝绿色,背景呈黄色。
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