RNA降解了,建议在操作过程全程用喷壶喷洒75%酒精,最好一个人戴口罩独自操作,不让无干人员靠近,也不言语,尽量吸干75%酒精,不等风干,否则暴露在外的时间太长RNA会降解。另外,琼脂糖电泳所用的TAE最好现配先用 (包括电泳槽),电压建议是80V,15—20min
有降解,注意操作吧
可能是RNA降解了!18s和28s条带很淡,5s条带很亮!
Trizol提取鸡肝脏,用琼脂糖非变性胶电泳,会发现只有16S的条带(只能看到一条带),但是用甲醛变性胶电泳,28S和18S条带都在,和您这个情况有些类似。其实用Trizol提取没那么容易降解,况且你的5S RNA很亮(说明5S含量高),很完整(说明基本没有降解,如果28S已经降解到看不见的程度,那5S条带是不可能幸免的)。若怀疑试剂,提取流程或者电泳阶段发生降解,那随便找棵花花草草验证一下就可以
首先,5S条带比较完整,28S和18S条带虽然不能观察到完整的条带,但是没有明显的拖尾,条带两端可以观察到被染色,但是没有观察到拖尾,所以出现降解可能性不大。由于Trizol对肝糖原缺乏特定的清除能力,所以Trizol提取的肝脏RNA容易混杂多糖污染,电泳时就常出现您这种情况,尤其使用非变性胶做电泳检测。建议做一个甲醛变性胶电泳看看,通常电泳结果会改善很多。