标签: PCR-SSP 引物 分析实验
PCR序列特异性引物分析法可以用于:(1)特异识别特定等位基因的引物通过PCR扩增检测序列多态性。(2)检测MN基因型。
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1.PCR扩增PCR反应体系为20μl(2个体系,分别为引物1和引物2),含模板2μl(约50ng),引物各1.5μl,dNTP1.6μl(0.4mM),10×Buffer缓冲液2μl,Taq酶1.0U,加双蒸水至20.0μl;PCR反应条件为94℃4min,94℃1.5min/52℃2.0min/72℃2.0min,30个循环。
2.PCR 扩增产物的检测 取PCR 扩增产物2μl,6%聚丙烯酰胺凝胶电泳(T=6%,C=3.3%,凝胶规格为82mm×64mm×0.75mm)。电极缓冲液为1×TBE。将加有1/5 体积上样缓冲液的酶切产物电泳,220 v 电压,电泳2-3h。银染显色
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