标签: 谷丙转氨酶;活性;
谷丙转氨酶活性测定的基本原理;掌握谷丙转氨酶活性测定的方法。(来源:生物化学与分子生物学实验指导,邵雪玲等,武汉大学出版社,2003)
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溶液配制: 1. 丙酮酸标准溶液:准确称取22 mg纯净丙酮酸钠,用pH 7.4磷酸缓冲液定容至100 ml。 2. SGPT底物溶液:准确称取α-酮戊二酸87.6 mg,dl-丙氨酸5.34g,先用90 ml 0.1 mol/L pH7.4的磷酸缓冲液溶解,然后用20%NaOH溶液调至pH7.4,再以上述磷酸缓冲液稀释至300 ml,冰箱保存可用一周(加氯仿防腐)。 3. 0.1 mol/L pH7.4的磷酸缓冲液。 4. 2,4-二硝基苯肼溶液:称取19.8 mg2,4-二硝基苯肼,置于100 ml容量瓶中,先用8 ml浓盐酸溶解后,再加水稀释至刻度。 5. 0.4 mol/L氢氧化钠溶液。 操作步骤: 1. 标准曲线的绘制:取干燥洁净试管6支,编号,按下表所示添加试剂。 向每管加0.5 ml2,4-二硝基苯肼,再保温20 min,分别向各管加入0.4 mol/L氢氧化钠溶液5 ml,室温下静置10 min后,用蒸馏水调零点,于520 nm处测光密度。以各管光密度减去空白管光密度为纵坐标,丙酮酸微克数为横坐标作标准曲线。 2. SGPT活力测定:取洁净干燥试管4支,即测定管、对照管各2支,按下表添加试剂。 各管反应完毕,混匀,室温下静置10 min后,再以蒸馏水调零点测定光密度。由标准曲线上查得丙酮酸微克数,根据下式计算SGPT 的活力:SGPT 活力(单位)=(测定管微克数-对照管微克数)/2.5×0.1。
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