我一般都选择先离心,然后弃去培养液,即去除DMSO,加入新鲜培养液后接种于培养瓶或培养皿中
本实验室均采用第一种,因为离心导致细胞破碎说明细胞状态已经不好了,不如早点除去。DMSO对细胞有毒性,可能导致细胞变异等。
neurotech二个方案我都用过,个人觉得还是第一种方案比较好,第一次复苏我用的第二种方案,结果我养的悬浮细胞全部贴壁生长了,一周前又用第一种方案复苏了两株细胞,现在细胞状态还不错。真心觉得DMSO不能留。
neurotech老兄说的第二个方案我用过,除非你的细胞很皮实,否则很容易让细胞在这24h内状态变差。不差那离心的几分钟,与重新复苏比起来,这点时间算占便宜了。
两种方案可供选择:一、复苏时,行离心,弃上清后,种入瓶中。主要目的是防止DMSO对细胞造成损害,但刚复苏的细胞教脆弱,离心易导致细胞破碎。二、复苏时,直接将冻存管里的液体倒入培养瓶中,另外添加适量的培养基,孵箱24h,待贴壁后行常规换液。省去了离心一步,避免离心时细胞破裂。但DMSO未能去除,长时间培养可能会对细胞有损害。个人觉得第二种方案较方便。