膳食支链氨基酸改变小鼠心肌梗死后心脏重构与功能

Dietary Branched-Chain Amino Acids Modify Postinfarct Cardiac Remodeling and Function in the Murine Heart

作者信息Daniel C Nguyen, Collin K Wells, Madison S Taylor, Yania Martinez-Ondaro, Richa Singhal, Kenneth R Brittian, Robert E Brainard, Joseph B Moore, Bradford G Hill
PMID39950451
发布时间2025-02-18
DOI10.1161/JAHA.124.037637

实验完整度

包含体外细胞实验(心脏成纤维细胞分化)和体内动物模型(非再灌注心肌梗死小鼠),并进行超声心动图、组织学及分子验证,多层次证据支持结论。

主要模型

C57BL/6J小鼠非再灌注心肌梗死模型 原代心脏成纤维细胞

重点核对

饮食干预:低(1/3×)或高(2×)BCAA定制饮食,MI前2周,MI后4周 动物品系与性别:C57BL/6J,雄性和雌性 MI模型:非再灌注MI,左冠状动脉永久结扎 检测时间点:MI前基线,MI后2周和4周 检测指标:超声心动图(每搏输出量、心输出量等)、组织学(心肌细胞长度、毛细血管密度等)

摘要

背景:支链氨基酸(BCAAs)来源于饮食,在心肌梗死(MI)后心脏组织中显著升高。然而,膳食BCAA水平是否影响MI后重构仍不清楚。方法:为了研究膳食BCAA对MI后心脏重构和功能的影响,我们在MI前给小鼠喂食低或高BCAA饮食2周,MI后继续喂食4周。通过超声心动图、重力测量和组织病理学分析评估心脏结构和功能变化。免疫印迹用于评估BCAA对分离的心脏肌成纤维细胞分化的影响。结果:与高BCAA饮食相比,低BCAA饮食使循环BCAA浓度降低超过2倍。尽管喂食定制饮食的雌性小鼠的体重和心脏质量没有差异,但喂食高BCAA饮食的雄性小鼠的体重和心脏质量显著高于低BCAA饮食组。低BCAA饮食在MI后保留了每搏输出量和心输出量,而高BCAA饮食促进了心脏功能的进行性下降。尽管体外肌成纤维细胞分化需要BCAA,但饮食组之间的心脏纤维化、瘢痕胶原蛋白拓扑结构和心肌细胞横截面积没有差异;然而,与低BCAA组相比,喂食高BCAA饮食的雄性小鼠心肌细胞更长,毛细血管密度更高。结论:低BCAA饮食可减轻小鼠MI后离心性心肌细胞重构和心脏功能丧失,且饮食效应在雄性中更为显著。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
膳食BCAA水平是否影响心肌梗死后的心脏重构和功能。
核心机制
低BCAA饮食可能通过减轻离心性心肌细胞肥大来改善心脏功能,但具体机制尚不明确。
主要证据
低BCAA饮食保留了MI后小鼠的每搏输出量和心输出量,减少了心脏质量增加和肺水肿,且雄性小鼠高BCAA饮食组心肌细胞更长,毛细血管密度更高。
研究意义
本研究提供概念验证,表明膳食成分可显著影响MI后心脏重构,调整饮食可能是一种改善心脏重构和功能的可转化干预措施。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

饮食干预与MI模型建立

明确不同BCAA饮食对循环BCAA水平的影响,并建立MI模型以研究对心脏重构的影响。

将雄性及雌性C57BL/6J小鼠分为低、高BCAA饮食组,MI前2周开始喂养,MI后继续喂养4周;通过左冠状动脉永久结扎建立非再灌注MI模型。

2

心脏功能评估

通过超声心动图评估饮食对MI后心脏功能的影响。

在基线、MI后2周和4周进行超声心动图检查,测量心率、心室容积、射血分数、每搏输出量、心输出量等参数。

3

组织学与形态学分析

评估心脏结构重构,包括心肌细胞大小、纤维化和毛细血管密度。

MI后4周取心脏组织,进行组织学染色,包括麦胚凝集素染色测量心肌细胞面积和长度,异凝集素B4染色评估毛细血管密度,天狼星红染色检测胶原纤维。

4

体外成纤维细胞分化实验

评估BCAA对心脏肌成纤维细胞分化的直接影响。

分离原代心脏成纤维细胞,在不同浓度BCAA(0、100、400 μM)存在下,用TGF-β处理48小时,通过免疫印迹检测Col1a1、periostin和α-SMA的表达。

5

心脏BCAA含量与代谢基因表达分析

检测心脏内BCAA水平及BCAA代谢相关基因表达是否受饮食影响。

通过液相色谱-串联质谱法检测MI后心脏组织中的BCAA浓度,并通过RT-qPCR检测BCAA转运体、分解代谢基因和心力衰竭相关基因的表达。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
C57BL/6J小鼠Jackson Laboratory--
低BCAA饮食(TD.150662)Envigo TekladTD.150662
高BCAA饮食(TD.170323)Envigo TekladTD.170323
标准饲料(Cat: 5010)LabDiet5010
美洛昔康----
Vevo 3100Visual Sonics--
天狼星红染液----
麦胚凝集素Vector LabsRL-1022
异凝集素B4Vector LabsFL-1201
DAPIInvitrogenD3571
基恩士成像系统Keyence--
尼康A1R MP+多光子显微镜Nikon--
MATLAB软件包CurveAlign和CT-FIRE----
BCAA检测试剂盒(ab83374)Abcamab83374
ABSciex 4000 Qtrap串联质谱仪Applied Biosystems/MDS Analytical Technologies--
安捷伦1260系列超高效液相色谱系统Agilent Technologies--
II型胶原酶Worthington46H16739
DMEM/F12 GlutaMax培养基Gibco10565018
胎牛血清VWR1500-500H
青霉素/链霉素/两性霉素BSigmaA5955
胰岛素转铁蛋白硒(ITS-G)Gibco41400045
人碱性成纤维细胞生长因子Peprotech100-18B
转化生长因子-βPeproTech100-21
L-亮氨酸Sigma-AldrichL8912
L-异亮氨酸Sigma-AldrichI7403
L-缬氨酸Sigma-AldrichV0513
蛋白酶抑制剂混合物Sigma-AldrichP8340
PVDF膜Cytiva10600021
Pierce ECL Plus免疫印迹底物Thermo Scientific32132
ChemiDoc成像仪BioRad--
抗COL1A1抗体Thermo FisherPA5-29569
抗periostin抗体MilliporeABT253
抗α-平滑肌肌动蛋白抗体Cell Signaling19245S
抗兔IgG HRP偶联抗体Cell Signaling7074
RNeasy Plus Universal Mini试剂盒Qiagen73404
Superscript IV VILO Master Mix(含ezDNase酶)Thermo Scientific11766050
SYBR Green荧光染料VWR101414-278
QuantStudio5----
Graphpad Prism 10----

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
实验动物与饮食
动物品系:C57BL/6J;性别:雄性和雌性;饮食:低(TD.150662)和高(TD.170323)BCAA定制饮食,以及正常饲料(Cat: 5010);饮食周期:MI前2周,MI后4周;环境:SPF级,24°C,44-65%相对湿度,12小时光照/黑暗循环。
阅读提示:Methods: Experimental Animals and Diets
非再灌注心肌梗死模型
小鼠周龄:12周;麻醉:戊巴比妥(50 mg/kg)和氯胺酮(50 mg/kg)腹腔注射;手术:左冠状动脉永久结扎(7-0丝线);镇痛:美洛昔康(10 mg/kg)术前及术后24、48小时。
阅读提示:Methods: Nonreperfused Myocardial Infarction and Echocardiography
超声心动图评估
检测点:基线(MI前)、MI后2周和4周;麻醉:异氟烷;测量参数:LV内径、LV质量(校正)、室壁厚度、舒张末期容积、收缩末期容积、每搏输出量、射血分数、心输出量、缩短分数、等容舒张时间;测量次数:M型每次4次,B型5次取平均,脉冲波多普勒9次取平均。
阅读提示:Methods: Echocardiography Analysis
组织学与形态学分析
组织处理:心脏在舒张期用2% KCl停跳,切片1mm,10%福尔马林固定,石蜡包埋,4μm切片;染色:PSR(胶原)、WGA(细胞膜)、Isolectin B4(毛细血管)、DAPI(细胞核);成像:Keyence成像系统;分析:Keyence BZ-X800分析器。
阅读提示:Methods: Histopathology
体外成纤维细胞分化实验
细胞:原代心脏成纤维细胞(P1);饥饿处理:无BCAA的DMEM/F12 GlutaMax培养基饥饿24小时;刺激:TGF-β(10 ng/mL)处理48小时;BCAA浓度:0、100、200、400 μM(L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-缬氨酸按45.9%缬氨酸、35.3%亮氨酸、18.8%异亮氨酸比例添加);检测:免疫印迹检测Col1a1、periostin、α-SMA。
阅读提示:Methods: Primary Cardiac Fibroblast Isolation and Culture; Figure 5 legend