恒河猴免疫与长期免疫应答监测
评估mRNA-1273免疫后一年内血液及上下气道的体液和细胞免疫应答动力学。
恒河猴于第0周和第4周肌肉注射100 μg mRNA-1273或mRNA对照，在第6、24/25、42/48周采集血清、BAL和鼻洗液，检测结合抗体、中和抗体、抗体亲和力、记忆B细胞和T细胞应答。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
mRNA-1273疫苗接种一年后对恒河猴SARS-CoV-2 Delta变体的保护与肺部回忆性抗体应答一致
Protection from SARS-CoV-2 Delta one year after mRNA-1273 vaccination in rhesus macaques coincides with anamnestic antibody response in the lung.
实验完整度
高包含恒河猴疫苗接种与活病毒攻击模型、体液与细胞免疫检测及肺部病理验证
主要模型
Indian-origin rhesus macaques SARS-CoV-2 B.1.617.2 攻击模型 Syrian hamsters
重点核对
恒河猴分组：mRNA-1273组8只、mRNA对照组8只，于第0周和第4周肌肉注射100 μg 攻击：初免后49周，以2×10^5 PFU B.1.617.2经气管内（1.5×10^5 PFU）和鼻内（0.5×10^5 PFU）途径感染 样本采集时间：免疫后第6、24/25、42/48周及攻击后第2、4、7、14天采集血清、BAL和鼻拭子 检测终点：sgRNA_E/N拷贝数、TCID50、血清结合/中和滴度、BAL与鼻洗液抗体、B/T细胞应答及肺组织病理与病毒抗原 BAL样本在第6周和第25周仅用S1肽段刺激，攻击后样本用S1和S2肽段刺激
摘要
mRNA-1273疫苗对SARS-CoV-2 Delta变异株的效力随时间减弱；然而，关于免疫应答持久性对保护作用影响的数据有限。在此，我们免疫恒河猴，并在一年内评估血液及上、下气道中的免疫应答。针对Delta的血清中和滴度在第6周（峰值）和第48周（攻击时）的半数抑制稀释度（ID50）分别为280和34。支气管肺泡灌洗液（BAL）中的抗体结合滴度也下降。Delta攻击后第4天，BAL中病毒已不可培养，亚基因组RNA较对照动物下降约3-log10。鼻拭子中sgRNA降低1-log10，病毒仍可培养。攻击后第4天在BAL中检测到回忆性抗体（滴度增加590倍），但未检测到T细胞应答。mRNA-1273介导的肺部保护是持久的但延迟，并可能依赖于回忆性抗体应答。上、下气道的快速持久保护可能最终需要加强免疫。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- mRNA-1273接种近一年后，对SARS-CoV-2 Delta变体的保护是否持久，以及其与抗体应答持久性的关系。
- 核心机制
- 肺部保护可能依赖于攻击后局部回忆性抗体应答，而非攻击前血清中和滴度；mRNA-1273介导的肺部保护持久但延迟。
- 主要证据
- 恒河猴接种mRNA-1273后49周攻击B.1.617.2：攻击后第4天BAL中病毒不可培养、sgRNA较对照下降约3-log10，BAL中B.1.617.2结合抗体滴度较第42周升高590倍；鼻拭子sgRNA仅降低1-log10且病毒仍可培养；肺组织未检测到病毒抗原。
- 研究意义
- mRNA-1273介导的肺部保护持久但延迟，上气道保护有限，提示为维持上下气道持续保护可能需要加强免疫。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
B.1.617.2攻击及病毒复制检测
评估免疫后约一年对Delta变体攻击的保护效果。
初免后49周，以2×10^5 PFU B.1.617.2经气管内和鼻内途径攻击，攻击后第2、4、7、14天采集BAL和鼻拭子，检测sgRNA_E/N拷贝数和TCID50。
攻击后回忆性抗体应答及B/T细胞应答检测
探究攻击后局部和全身免疫应答的回忆性变化。
攻击后采集血清、BAL和鼻洗液检测结合抗体和中和抗体，并用流式细胞术检测记忆B细胞和T细胞应答。
肺部病理与病毒抗原检测
评估mRNA-1273对肺部炎症和病毒抗原的保护作用。
攻击后第7天，每组4只恒河猴的肺组织进行H&E染色和免疫组化检测SARS-CoV-2抗原，由盲法病理学家评分。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
评估体内效果
数据分析与统计
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 血清与黏膜抗体检测 | 山羊抗人抗体（磺基标签标记） | Meso Scale Diagnostics | R32AJ-1 |
| 人/非人灵长类IgA检测抗体 | Meso Scale Diagnostics | D20JJ-6 | |
| 免疫组化 | SARS-CoV-2核衣壳抗体（多克隆） | GeneTex | GTX135357 |
| B细胞探针结合 | LIVE/DEAD可固定Aqua死细胞染色试剂盒 | ThermoFisher Scientific | L34966 |
| T细胞刺激 | PepMix SARS-CoV-2（S1+S2）肽池 | JPT Peptide Techologies | -- |
| PepMix SARS-CoV-2（NCAP）肽池 | JPT Peptide Techologies | PM-WCPV-NCAP | |
| sgRNA定量 | RNAzol BD柱式试剂盒 | Molecular Research Center | RC 292 |
| TaqMan快速病毒一步法预混液 | ThermoFisher Scientific | 4444436 | |
| 假病毒中和试验 | FuGENE 6转染试剂 | Promega | E2692 |
| 表位定位 | Series S CM5传感器芯片 | Cytiva | 29149603 |
| His捕获试剂盒2型 | Cytiva | 29234602 | |
| 胺偶联试剂盒 | Cytiva | BR100633 | |
| 血清与黏膜抗体检测 | V-PLEX SARS-CoV-2 panel 13试剂盒 | Meso Scale Diagnostics | K15466U (ACE 2) |
| V-PLEX SARS-CoV-2 384 panel 2 (IgG)试剂盒 | Meso Scale Diagnostics | K25420U | |
| 总IgG定量 | 同种型分型panel 1人/非人灵长类试剂盒 | Meso Scale Diagnostics | K15203D-2 |
| 麻疹抗体定量 | 猴抗麻疹IgG | Alpha Diagnostic International | 530-170-MMG |
| BAL和鼻洗液浓缩 | Amicon Ultra-15离心过滤单元（50,000 MWCO） | Millipore Sigma | UFC905096 |
| ELISA | 链霉亲和素多阵列384孔板 | Meso Scale Diagnostics | L21SA-1 |
| MSD读取缓冲液T（4X） | Meso Scale Diagnostics | R92TC | |
| MSD封闭剂A试剂盒 | Meso Scale Diagnostics | R93AA-1 | |
| 抗体亲和力检测 | 硫氰酸钠溶液 | Millipore-Sigma | 80518-500ML-F |
| 测序 | NEBNext ultra II RNA文库制备试剂盒（Illumina） | New England Biolabs | E7770 |
| NEBNext多重寡核苷酸 | New England Biolabs | E6440 |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 恒河猴免疫 | 动物年龄、性别、分组（每组8只）、免疫剂量（100 μg）、途径（肌肉注射）、时间（第0周和第4周） 阅读提示：Methods：Rhesus macaque model and immunizations |
| B.1.617.2攻击 | 攻击时间（初免后49周）、剂量（2×10^5 PFU）、途径（气管内和鼻内）及体积分配 阅读提示：Methods：Delta challenge |
| 病毒复制检测 | 样本类型（BAL、鼻拭子）、采样时间点（攻击后第2、4、7、14天）、sgRNA检测方法及检测限 阅读提示：Methods：Subgenomic RNA quantification；Figure 6 legend |
| 抗体检测 | 血清稀释度、BAL/鼻洗液浓缩倍数、检测平台（MSD）、标准品（WHO国际标准） 阅读提示：Methods：Serum and mucosal antibody titers |
| 肺部病理与免疫组化 | 采样时间（攻击后第7天）、每组动物数（4只）、抗体稀释度（1:2000）、评分标准 阅读提示：Methods：Histopathology and immunohistochemistry；Figure 7 legend |