类固醇抵抗性肾病综合征相关MYO1E突变对肌球蛋白1e定位、动力学及活性的差异性影响

背景：Myo1e是一种在足细胞中富集的非肌肉运动蛋白。MYO1E基因突变与类固醇抵抗型肾病综合征（SRNS）相关。基因组测序发现的大多数MYO1E变异体尚未进行功能表征。本研究旨在分析Myo1e运动结构域中的两个突变——T119I和D388H，这些突变是基于蛋白质序列保守性筛选的。方法：通过腺病毒感染将EGFP标记的人源Myo1e构建体导入Myo1e敲除小鼠足细胞来源的细胞中，以分析Myo1e蛋白稳定性、Myo1e定位以及已知依赖Myo1e活性的网格蛋白依赖性内吞作用。此外，利用杆状病毒表达系统表达截短的Myo1e构建体，用于体外测定Myo1e的ATP酶活性和运动活性。结果：两种突变体均能在Myo1e敲除细胞中表达为全长蛋白。然而，与野生型（WT）Myo1e不同，T119I变异体未在细胞连接处或网格蛋白包被囊泡（CCVs）中富集。相比之下，D388H变异体的定位与野生型相似。D388H变异体从细胞间连接和CCVs解离的速率降低，表明该突变影响了Myo1e与结合伴侣的相互作用。D388H突变体的ATP酶活性和肌动蛋白丝转运能力显著降低，这支持了基于细胞的实验结果。结论：T119I和D388H突变对Myo1e功能具有损害作用。本研究采用的实验方法可用于未来对SRNS相关新型MYO1E变异体的功能表征。