全脑投射示踪
验证mPFC与CL之间的相互投射及半球分布。
在mPFC或CL注射顺行/逆行病毒,结合fMOST成像观察投射。
The interconnected wirings between medial prefrontal cortex and claustrum and their governing roles in the methamphetamine reward memory in male mice.
病毒示踪、fMOST、光遗传、化学遗传、膜片钳、光纤记录及METH CPP行为模型,多层级功能与机制验证
雄性C57BL/6野生型小鼠 METH条件位置偏好(CPP)模型 mPFC与CL脑片膜片钳记录
METH剂量1 mg/kg,腹腔注射,奇数天训练配对 CPP训练8天,测试第9天 CNO剂量2 mg/kg腹腔注射或1 mM局部输注 病毒注射体积mPFC 200 nL、CL 50 nL 膜片钳记录oEPSCs/-70 mV和oIPSCs/+10 mV
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
验证mPFC与CL之间的相互投射及半球分布。
在mPFC或CL注射顺行/逆行病毒,结合fMOST成像观察投射。
识别投射和接收神经元的Glu/GABA属性及重叠情况。
双病毒标记结合免疫荧光,统计CaMKII和GAD67共标。
验证直接兴奋性和间接抑制性微环路。
光刺激末梢,记录oEPSCs和oIPSCs,应用TTX、4-AP、PTX、NBQX/AP5。
在体监测通路特异性激活对下游Glu/GABA活动的影响。
化学遗传激活上游,光纤记录GCaMP6s和jRGECO1a信号。
建立METH奖赏记忆模型并检测神经活动变化。
8天CPP训练,测试后记录AP和oEPSCs/oIPSCs,检测c-Fos。
分别抑制或激活mPFC-CL和CL-mPFC通路,检验对编码和提取的作用。
在CPP训练期或测试期给予CNO,记录CPP评分和c-Fos。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| METH CPP行为 | METH剂量1 mg/kg,腹腔注射;训练8天,测试第9天;小鼠性别雄性 阅读提示:Methods中Conditioned place preference (CPP)小节 |
| 化学遗传操作 | CNO剂量2 mg/kg腹腔注射或1 mM局部输注;给药时间(训练或测试前30 min或5 min) 阅读提示:Methods中In vivo chemogenetic manipulation小节 |
| 病毒注射 | 注射体积mPFC 200 nL、CL 50 nL;注射速率20 nL/min;坐标mPFC和CL 阅读提示:Methods中Stereotaxic surgery小节 |
| 膜片钳记录 | oEPSCs记录于-70 mV,oIPSCs记录于+10 mV;光刺激473 nm,3-5 mW,20 Hz 阅读提示:Methods中Whole-cell recordings小节 |