建立转流性结肠炎模型
创建无粪便通过结肠黏膜的炎症环境
对雄性Wistar大鼠进行近端结肠造口和远端黏液瘘手术,留置两周以产生转流性结肠炎
Sucralfate enemas reduce the oxidative tissue damage and preserves the contents of E-cadherin and ?-catenin in colonic mucosa without fecal stream
包含大鼠模型、组织学分析、免疫组织化学和MDA检测,具备体外模型、功能验证和机制层面验证。
Wistar大鼠转流性结肠炎模型 无粪便通过结肠黏膜
实验动物:雄性Wistar大鼠,数量36只 分组:生理盐水灌肠、硫糖铝1 g/kg/天、硫糖铝2 g/kg/天 处理时间:分别处死于治疗后2周和4周 检测指标:炎症评分、MDA水平、E-钙黏蛋白和β-连环蛋白含量
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
创建无粪便通过结肠黏膜的炎症环境
对雄性Wistar大鼠进行近端结肠造口和远端黏液瘘手术,留置两周以产生转流性结肠炎
比较不同剂量硫糖铝灌肠对转流性结肠炎的影响
将大鼠分为三组,分别接受生理盐水、硫糖铝1 g/kg/天或2 g/kg/天灌肠,处理2周或4周
评价硫糖铝对排除黏膜炎症的影响
通过HE染色评估隐窝长度减少、中性粒细胞浸润和上皮损伤,使用半定量评分
量化硫糖铝对无粪便通过黏膜氧化损伤的影响
测定结肠组织中的丙二醛(MDA)水平,作为TBARs
检测硫糖铝对E-钙黏蛋白和β-连环蛋白表达及其定位的影响
通过免疫组织化学染色并计算机辅助图像分析量化组织中E-钙黏蛋白和β-连环蛋白含量
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 免疫组化 | Trilogy™ | Cell-Marque™, Sigma-Aldrich | -- |
| 抗E-钙黏蛋白抗体(克隆NCH-38) | Agilent-Dako | -- | |
| 抗β-连环蛋白抗体(克隆β-catenin-1) | Agilent-Dako | -- | |
| LSAB2 + System-HRP试剂盒 | Agilent-Dako | -- | |
| DAB + 底物液体试剂盒 | Sigma-Aldrich | -- | |
| NIS-Elements™ | Nikon Inc. | -- | |
| MDA测定 | UV/vis 6105分光光度计 | Jenway, Bibby Scientific | -- |
| 丁羟甲苯 | -- | 128-37-0 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 模型建立 | 大鼠品系、性别、数量;手术方式:近端结肠造口和远端黏液瘘;术后恢复时间:两周 阅读提示:Methods: Surgical technique |
| 分组与处理 | 灌肠体积:2 mL/天;硫糖铝剂量:1 g/kg/天和2 g/kg/天;处理时间:2周和4周;每组动物数:12只,每时间点6只 阅读提示:Methods: Experimental groups |
| 组织学分析 | 固定、包埋、切片厚度5μm;HE染色;炎症评分参数(隐窝长度、中性粒细胞浸润、上皮损伤);评分分级0-+++;每动物三个视野的平均值 阅读提示:Methods: Histological analysis |
| 免疫组化 | 抗原修复条件(Trilogy 1:100,95°C 45分钟);一抗稀释度(E-cadherin 1:100,β-catenin 1:200);二抗系统(LSAB2+HRP);显色(DAB);定量(NIS-Elements软件,每个动物三个视野的平均值) 阅读提示:Methods: Immunohistochemical staining and Protein tissue quantification |
| MDA测定 | 组织用量1g;匀浆方法(PBS,超声30秒三次);反应条件(4% BHT 25μL, 12% TCA 1mL, 0.73% TBA 1mL, Tris/HCl 750μL, 100°C水浴60分钟);离心转速5000 rpm,10分钟;测量波长532 nm 阅读提示:Methods: Malondialdehyde assay |
| 统计分析 | 比较组间差异使用Mann-Whitney检验;显著性水平p<0.05 阅读提示:Methods: Statistical analysis |