硫糖铝灌肠可减少无粪便通过结肠黏膜的氧化性组织损伤并保持E-钙黏蛋白和β-连环蛋白的含量

Sucralfate enemas reduce the oxidative tissue damage and preserves the contents of E-cadherin and ?-catenin in colonic mucosa without fecal stream

作者信息Daniela Tiemi Sato, Fabio Guilherme Campos, Paulo Gustavo Kotze, Roberta Laís Santos Mendonça, Danilo Toshio Kanno, José Aires Pereira, Carlos Augusto Real Martinez
PMID34852133
发布时间2021-11-29
DOI10.1590/ACB361007

实验完整度

包含大鼠模型、组织学分析、免疫组织化学和MDA检测,具备体外模型、功能验证和机制层面验证。

主要模型

Wistar大鼠转流性结肠炎模型 无粪便通过结肠黏膜

重点核对

实验动物:雄性Wistar大鼠,数量36只 分组:生理盐水灌肠、硫糖铝1 g/kg/天、硫糖铝2 g/kg/天 处理时间:分别处死于治疗后2周和4周 检测指标:炎症评分、MDA水平、E-钙黏蛋白和β-连环蛋白含量

摘要

目的:评估硫糖铝灌肠对实验性转流性结肠炎组织中E-钙黏蛋白和β-连环蛋白含量的影响。方法:将36只雄性Wistar大鼠行近端结肠造口和远端黏液瘘。将它们分为三组:第一组每日接受生理盐水灌肠(2 mL/天),另外两组分别每日接受1或2 g/kg/天的硫糖铝灌肠。每组6只动物在两周后处死,6只在四周后处死。通过组织学分析评估排除黏膜的炎症。通过测量丙二醛组织水平来量化氧化损伤。通过免疫组织化学鉴定E-钙黏蛋白和β-连环蛋白的表达,并通过计算机辅助图像分析量化其含量。结果:硫糖铝灌肠在四周时降低了接受2 g/kg/天治疗动物的炎症,并降低了无粪便通过黏膜的氧化损伤水平,无论浓度和干预时间如何。在那些接受硫糖铝治疗的动物中,无粪便通过节段的E-钙黏蛋白和β-连环蛋白含量增加。结论:硫糖铝可减少炎症和氧化应激,并增加无粪便通过结肠黏膜中E-钙黏蛋白和β-连环蛋白的组织含量。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
评估硫糖铝灌肠对实验性转流性结肠炎中E-钙黏蛋白和β-连环蛋白组织含量的抗氧化作用
核心机制
硫糖铝通过降低氧化应激和炎症,增加E-钙黏蛋白和β-连环蛋白含量
主要证据
大鼠转流性结肠炎模型中,硫糖铝灌肠显著降低MDA水平和炎症评分,增加E-钙黏蛋白和β-连环蛋白的免疫组化含量,且与剂量和时间无关
研究意义
提示硫糖铝灌肠可能成为治疗转流性结肠炎的有效策略,但需临床研究验证其在人体的疗效

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

建立转流性结肠炎模型

创建无粪便通过结肠黏膜的炎症环境

对雄性Wistar大鼠进行近端结肠造口和远端黏液瘘手术,留置两周以产生转流性结肠炎

2

分组与处理

比较不同剂量硫糖铝灌肠对转流性结肠炎的影响

将大鼠分为三组,分别接受生理盐水、硫糖铝1 g/kg/天或2 g/kg/天灌肠,处理2周或4周

3

组织学炎症评估

评价硫糖铝对排除黏膜炎症的影响

通过HE染色评估隐窝长度减少、中性粒细胞浸润和上皮损伤,使用半定量评分

4

氧化损伤定量

量化硫糖铝对无粪便通过黏膜氧化损伤的影响

测定结肠组织中的丙二醛(MDA)水平,作为TBARs

5

免疫组化分析

检测硫糖铝对E-钙黏蛋白和β-连环蛋白表达及其定位的影响

通过免疫组织化学染色并计算机辅助图像分析量化组织中E-钙黏蛋白和β-连环蛋白含量

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

验证样本或模型特征
验证分子表达变化
数据分析与统计

产品清单

实验环节名称品牌货号
Trilogy™Cell-Marque™, Sigma-Aldrich--
抗E-钙黏蛋白抗体(克隆NCH-38)Agilent-Dako--
抗β-连环蛋白抗体(克隆β-catenin-1)Agilent-Dako--
LSAB2 + System-HRP试剂盒Agilent-Dako--
DAB + 底物液体试剂盒Sigma-Aldrich--
NIS-Elements™Nikon Inc.--
UV/vis 6105分光光度计Jenway, Bibby Scientific--
丁羟甲苯--128-37-0

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
模型建立
大鼠品系、性别、数量;手术方式:近端结肠造口和远端黏液瘘;术后恢复时间:两周
阅读提示:Methods: Surgical technique
分组与处理
灌肠体积:2 mL/天;硫糖铝剂量:1 g/kg/天和2 g/kg/天;处理时间:2周和4周;每组动物数:12只,每时间点6只
阅读提示:Methods: Experimental groups
组织学分析
固定、包埋、切片厚度5μm;HE染色;炎症评分参数(隐窝长度、中性粒细胞浸润、上皮损伤);评分分级0-+++;每动物三个视野的平均值
阅读提示:Methods: Histological analysis
免疫组化
抗原修复条件(Trilogy 1:100,95°C 45分钟);一抗稀释度(E-cadherin 1:100,β-catenin 1:200);二抗系统(LSAB2+HRP);显色(DAB);定量(NIS-Elements软件,每个动物三个视野的平均值)
阅读提示:Methods: Immunohistochemical staining and Protein tissue quantification
MDA测定
组织用量1g;匀浆方法(PBS,超声30秒三次);反应条件(4% BHT 25μL, 12% TCA 1mL, 0.73% TBA 1mL, Tris/HCl 750μL, 100°C水浴60分钟);离心转速5000 rpm,10分钟;测量波长532 nm
阅读提示:Methods: Malondialdehyde assay
统计分析
比较组间差异使用Mann-Whitney检验;显著性水平p<0.05
阅读提示:Methods: Statistical analysis