胎盘组织采集与冷冻切片
获取妊娠90天和130天奶牛胎盘组织,用于空间转录组分析
从两头荷斯坦奶牛分别采集妊娠90天和130天的胎盘组织,包含子叶/胎盘块及邻近区域,用DPBS清洗,OCT包埋,切成10μm冷冻切片。
Spatially resolved transcriptomic profiling of placental development in dairy cow.
包含空间转录组测序、免疫组化验证及生物信息学分析,两个独立证据层级。
荷斯坦奶牛妊娠90天胎盘组织 荷斯坦奶牛妊娠130天胎盘组织
妊娠阶段:90天和130天,各取一个样本 物种与品种:健康荷斯坦奶牛 组织处理:胎盘子叶及周围组织,包含母体和胎儿组织,用DPBS清洗,OCT包埋,10μm冷冻切片 Stereo-seq分析单元:Bin 100(100×100 DNB),共71,899个Bins 免疫组化抗体:YBX1 Rabbit mAb (A3534, 1:100) 和 NPAS2 Rabbit pAb (A16930, 1:100)
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获取妊娠90天和130天奶牛胎盘组织,用于空间转录组分析
从两头荷斯坦奶牛分别采集妊娠90天和130天的胎盘组织,包含子叶/胎盘块及邻近区域,用DPBS清洗,OCT包埋,切成10μm冷冻切片。
在空间上捕获胎盘组织的基因表达
将组织切片贴附于Stereo-seq芯片,固定、染色、成像、透化,构建文库,并在MGI DNBSEQ-Tx测序仪上测序。
鉴定胎盘细胞类型及其空间分布
使用Seurat进行降维聚类(Bin 100),鉴定16个聚类,根据标记基因注释为10种主要细胞类型,并用Souporcell区分母体和胎儿来源。
解析UNC异质性及关键转录因子
对UNC进行亚群分析,鉴定7个亚群,使用GENIE3构建转录因子调控网络,并通过免疫组化验证YBX1和NPAS2的表达。
揭示胎盘微环境细胞间通讯及滋养层分化路径
使用CellChat分析配体-受体相互作用,Monocle3进行拟时序轨迹分析。
鉴定空间共变基因模块及其功能
使用Hotspot识别空间自相关基因模块(EG 16个,MG 15个),进行GO富集和PPI网络分析。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 组织冷冻切片 | Leica CM1950冷冻切片机 | Leica | -- |
| 核酸染色 | 核酸染色试剂 | Thermo Fisher | Q10212 |
| 成像 | Ti-7 Nikon Eclipse显微镜 | Nikon | -- |
| cDNA纯化 | VAHTS DNA纯化磁珠 | Vazyme | N411 |
| 测序 | MGI DNBSEQ-Tx测序仪 | MGI | -- |
| 免疫组化 | YB-1/YBX1兔单克隆抗体 | -- | A3534 |
| NPAS2兔多克隆抗体 | -- | A16930 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 胎盘组织采集 | 妊娠阶段(90天和130天)、样本量(每个阶段1个)、品种(荷斯坦奶牛) 阅读提示:Methods: Tissue collection and cryopreservation |
| Stereo-seq文库构建 | 芯片类型、透化时间(37°C 5分钟)、测序平台及读长 阅读提示:Methods: Stereo-seq library preparation and sequencing |
| 数据分析参数 | 聚类分辨率(0.5)、k值(30)、可变基因数(3000)、Bin大小(100) 阅读提示:Methods: Stereo-seq data processing, integration, and visualization |
| 免疫组化 | 抗体稀释比(1:100)、抗原修复方法、一抗孵育条件(4°C过夜) 阅读提示:Methods: Immunohistochemistry |