四特异性抗体联合体外扩增NK细胞输注用于改善食管癌控制的开发与临床前评价

背景：食管鳞状细胞癌（ESCC）高度异质，导致药物疗效有限和耐药。抗体治疗因应答率低而获益有限。靶向多种肿瘤抗原和自然杀伤（NK）细胞受体的多特异性抗体可能克服这些挑战，但其在ESCC治疗中的有效性尚不清楚。方法：对ESCC患者样本进行转录组测序和数据库分析以鉴定肿瘤抗原。设计靶向肿瘤抗原和NK细胞表面标志物的多特异性抗体。应用快速蛋白液相色谱和表面等离子体共振进行抗体质量控制。使用多种ESCC细胞系和来自不同供者的NK细胞，通过流式细胞术评估NK细胞细胞毒性和活化。使用免疫荧光测定确认共定位。进行转录组测序、流式细胞术和蛋白质印迹以探索分子机制。建立皮下和转移性异种移植肿瘤模型，以评估抗体联合NK细胞过继转移的体内抗肿瘤疗效。结果：EGFR的表达在所有ESCC样本中持续高表达，而MET在复发性ESCC中特异性上调，数据库也验证了两种抗原在肿瘤组织中的过表达。成功工程化抗体以实现多抗原结合。与仅NK组相比，四特异性抗体在体外显著增强NK细胞对ESCC和紫杉醇耐药细胞系的细胞毒性，最高达30%。转录组分析和实验验证表明，抗体触发免疫激活通路并增加NK细胞中肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ和颗粒酶B的表达，但也诱导NK细胞耗竭。在体内，与对照相比，四特异性抗体联合NK细胞输注发挥优越的抗肿瘤疗效，早期模型肿瘤体积减少82.3%，晚期模型减少65.7%。在转移性肿瘤模型中也观察到治疗效果。同时，联合治疗耐受良好，肿瘤组织中NK细胞浸润增强。结论：我们开发了四特异性抗体，可有效桥接ESCC细胞和NK细胞。该抗体具有增强NK细胞抗ESCC抗肿瘤活性的潜力。本研究支持四特异性抗体用于基于NK细胞的ESCC免疫治疗的临床转化。