CVF样本采集与处理
获取孕期宫颈阴道液样本用于类固醇定量。
从VMET2研究中招募有早产临床风险因素的单胎妊娠女性，使用月经盘采集CVF，稀释于5 ml磷酸盐缓冲盐水，分装后-80°C保存。
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基于质谱法对有早产高风险女性宫颈阴道孕酮及类固醇的定量分析
Mass spectrometry-based quantitation of cervicovaginal progesterone and steroids in women at high risk of preterm birth
实验完整度
中改编LC-MS/MS法检测CVF中13种类固醇，对25例孕妇样本进行横断面及纵向定量分析，并作统计比较。
主要模型
孕妇宫颈阴道液（CVF）样本 无并发症足月妊娠女性 不良结局妊娠女性
重点核对
CVF样本采集使用月经盘，稀释于5 ml磷酸盐缓冲盐水，分装后-80°C保存 采用UPLC-MS/MS进行13种类固醇的靶向定量，检测限分别为孕酮0.005 ng/ml、雄烯二酮0.01 ng/ml、皮质醇0.05 ng/ml 通过线性回归评估类固醇浓度与宫颈长度的关联 通过Wilcoxon–Mann–Whitney检验比较足月分娩与早产女性间类固醇浓度差异 通过线性混合效应模型（参与者ID为随机截距）评估类固醇浓度与采样时孕龄的关联
摘要
胎盘产生的类固醇（如孕酮）驱动妊娠期间循环浓度升高。据推测，宫颈阴道孕酮降低会导致宫颈缩短和早产（PTB）风险增加。尽管阴道孕酮被推荐用于预防早产，但其有效性仍不确定。虽然妊娠期常规测量血清和尿液孕酮，但对宫颈阴道液（CVF）中的孕酮浓度知之甚少。为此，我们改编了现有的基于质谱的检测方法，对14例无并发症足月妊娠和11例不良结局妊娠女性在妊娠12至24周采集的CVF中的13种类固醇激素进行定量。仅孕酮、雄烯二酮和皮质醇被检测到高于检测限。在无并发症足月妊娠中，这些类固醇的平均浓度分别为6.61±8.13、4.16±2.98和0.34±0.21 ng/g CVF。宫颈阴道孕酮与孕龄呈弱正相关（r2=0.15，P值=0.02），在12周和22周采集的配对样本中也观察到这一现象（n=5，配对Wilcoxon检验，P值=0.03）。随后早产（n=9）或足月分娩（n=15）的女性之间CVF类固醇水平无差异。我们的研究提供了一种稳健的CVF类固醇定量方法，并提示中孕期PTB风险与宫颈阴道孕酮浓度无关。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 宫颈阴道孕酮浓度是否与早产风险相关，以及能否用质谱法可靠定量CVF中的类固醇激素。
- 核心机制
- 文中未明确说明；研究未验证局部孕酮缺乏导致早产的因果机制，仅提出该假说并进行关联分析。
- 主要证据
- UPLC-MS/MS检测CVF中13种类固醇，仅孕酮、雄烯二酮和皮质醇高于定量下限；足月与早产女性间CVF类固醇水平无显著差异（孕酮P=0.766，皮质醇P=0.512，雄烯二酮P=0.18）；孕酮与孕龄呈弱正相关（R2=0.181，P=0.0215）。
- 研究意义
- 提供了一种稳健的CVF类固醇定量方法，可支持更大规模研究评估局部类固醇动态的临床相关性，并拓展至女性健康与生殖医学其他领域的研究。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
CVF类固醇的UPLC-MS/MS定量
建立并验证同时定量CVF中13种类固醇激素的质谱方法。
采用顺序有机溶剂萃取结合同位素标记内标，真空干燥后复溶，使用UPLC-MS/MS以极性切换和多反应监测模式进行靶向定量。
类固醇浓度与宫颈长度及妊娠结局的关联分析
检验CVF类固醇浓度是否与宫颈长度或早产相关。
对足月分娩（n=15）与早产（n=9）女性比较CVF中孕酮、皮质醇和雄烯二酮浓度，并用线性回归分析类固醇浓度与采样时宫颈长度的关联。
类固醇浓度的孕龄动态分析
评估CVF类固醇浓度随孕龄的变化趋势。
使用线性混合效应模型（参与者ID为随机截距）分析类固醇浓度与采样时孕龄的关联，并对5例配对样本进行Wilcoxon符号秩检验。
结合型类固醇的初步探索
探究CVF中是否存在硫酸化或葡萄糖醛酸化类固醇衍生物，以解释部分类固醇未检出。
使用高分辨率qTOF质谱在正负离子模式下进行初步分析。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| CVF样本采集 | 月经盘 | -- | -- |
| 质谱分析 | 超高效液相色谱-串联质谱仪 | -- | -- |
| 四极杆飞行时间质谱仪 | -- | -- | |
| 数据分析 | MassLynx软件（v4.1） | Waters Corporation | -- |
| TargetLynx软件 | Waters Corporation | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| CVF样本采集与处理 | 采样孕龄窗口（12–24周）、采样装置（月经盘）、稀释体积（5 ml PBS）、储存温度（−80°C）、纳入排除标准（采样前孕酮治疗者排除） 阅读提示：Materials and methods第一段及Supplementary Table S1 |
| UPLC-MS/MS类固醇定量 | 13种类固醇的色谱条件、仪器参数、分析物和内标、定量限和校准程序 阅读提示：Supplementary Materials and Methods及Supplementary Table S2、S3 |
| 妊娠结局分组与比较 | 足月分娩n=15、早产n=9的分组定义，以及Wilcoxon–Mann–Whitney检验的统计设计 阅读提示：Results and discussion第二段及Figure 2B图注 |
| 孕龄动态分析 | 线性混合效应模型随机截距设定、配对样本时间点（12–16周和20–24周）、配对样本量n=5 阅读提示：Results and discussion第四段及Figure 3图注 |