工程化T细胞衔接双特异性抗体靶向KRAS G12V新抗原并交叉识别HLA-A*11:01与HLA-A*03:01

背景：T细胞识别由人类白细胞抗原（HLA）分子呈递的肿瘤特异性新抗原，并可介导强效抗肿瘤免疫。然而，大多数新抗原为患者特异性，限制了其广泛的治疗适用性。KRAS G12V是存在于多种癌症类型中的复发性致癌突变，可产生由HLA-A*11:01呈递的共享新抗原。我们试图开发一种靶向该共享新抗原的T细胞衔接双特异性抗体。方法：我们筛选噬菌体展示文库以鉴定识别KRAS G12V/HLA-A*11:01复合物的单链可变片段（scFv）。候选scFv通过ELISA和流式细胞术进行表征。生成了一种包含新抗原特异性scFv和抗CD3结合域的双特异性单链双抗体，并使用肽脉冲靶细胞和KRAS G12V阳性癌细胞系评估了抗原特异性T细胞活化、细胞因子产生和细胞毒性。在人外周血单核细胞（PBMC）植入的异种移植小鼠模型中评估了抗肿瘤活性和安全性。结果：我们鉴定出scFv2，其选择性识别KRAS G12V/HLA-A*11:01复合物，并可区分野生型KRAS和其他KRAS突变肽。值得注意的是，scFv2也识别KRAS G12V/HLA-A*03:01复合物。由此产生的基于scFv2的双特异性单链双抗体（scDb2）在表达HLA-A*11:01或HLA-A*03:01的KRAS G12V阳性癌细胞中诱导了强效的抗原特异性T细胞活化、细胞因子释放和细胞毒性，对应估计的患者覆盖率在胰腺癌中约5–6%，在结直肠癌中约2%。scDb2识别内源性加工和呈递的新抗原，介导癌细胞杀伤，并在体内显著抑制肿瘤生长且无明显毒性。结论：这些发现鉴定了一种T细胞衔接双特异性抗体，能够识别由HLA-A*11:01和HLA-A*03:01共同呈递的KRAS G12V，为将新抗原靶向免疫治疗扩展至密切相关的HLA等位基因提供了框架，并可能拓宽在不同患者群体中的适用性。