参与者活动水平分类
客观区分活动与不活动妊娠参与者
使用加速度计测量第三孕期体力活动,按加拿大指南阈值分类为活动或不活动。
Exploring the Placental Lipidome in Physically Active vs. Inactive Pregnancies
含LC-MS/MS非靶向脂质组学、Western blot、AUROC和通路分析,但无独立第二证据层级或功能验证。
足月无并发症妊娠人胎盘样本 活动组与不活动组妊娠参与者
活动状态基于第三孕期加速度计数据分类,活动组需满足每周150分钟中等强度活动(或21.4分钟/天) 胎盘样本在分娩后1小时内采集,混合外周和中央子叶,液氮速冻后-80°C保存 脂质提取采用改良Bligh-Dyer法,使用约50±5mg粉末组织,加入内标后LC-MS/MS分析 Western blot检测MFSD2a,一抗1:1000稀释,二抗1:7000稀释,上样20μg总蛋白 数据分析采用FDR校正p<0.05和|log2FC|≥0.58阈值,AUROC评估脂质区分能力
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
客观区分活动与不活动妊娠参与者
使用加速度计测量第三孕期体力活动,按加拿大指南阈值分类为活动或不活动。
获取足月胎盘组织用于脂质组学和蛋白分析
分娩后1小时内采集胎盘,混合外周和中央子叶,液氮速冻后-80°C保存,粉碎后用于提取。
比较活动与不活动组胎盘脂质组成差异
改良Bligh-Dyer法提取脂质,LC-MS/MS数据采集,MZmine和Lipid Annotator处理,统计分析和通路分析。
评估DHA转运蛋白在活动与不活动组胎盘中的表达差异
Western blot检测MFSD2a,以总蛋白归一化,比较组间表达。
评估脂质作为体力活动生物标志物的潜力并探索通路变化
AUROC分析各脂质区分能力,BioPAN进行通路富集分析。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 脂质提取 | LC/MS级水 | Fisher Scientific | W6-4 |
| MS级甲醇 | Thermo Scientific | 047192.K2 | |
| 氯仿 | Sigma-Aldrich | 650498 | |
| 17:0胆固醇酯 | Avanti Research | 700186 | |
| 13:0溶血磷脂酰胆碱 | Avanti Research | 8554760 | |
| 19:0磷脂酰胆碱 | Avanti Research | 850367 | |
| Agilent HPLC样品瓶 | Agilent | 5188-6592 | |
| 液相色谱 | 甲醇 | Sigma Lichrosolv | 1.06035 |
| 异丙醇 | VWR BDH Chemicals HiPerSolv CHROMANORM | BDH20880 | |
| 甲酸铵 | Sigma Lichropur | 70221 | |
| Western blot | 蛋白酶抑制剂混合物 | Millipore Sigma | P8340 |
| MFSD2a抗体 | Abcam | AB307690 | |
| HRP标记山羊抗兔IgG二抗 | Bio-Rad | 1706516 | |
| Clarity Western ECL印迹底物 | Bio-Rad | 1721019 | |
| ChemiDoc XRS+分子成像仪 | Bio-Rad | -- | |
| Mini-PROTEAN TGX预制胶 | Bio-Rad | -- | |
| DC蛋白定量试剂盒 | Bio-Rad | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 参与者活动水平分类 | 加速度计型号和佩戴位置(PLACENTA项目为Actical®髋部,Expecting Success项目为Actigraph GT3X+腕部);活动阈值定义;第三孕期数据选择 阅读提示:Methods中Participants and Placenta Tissue小节 |
| 胎盘样本采集与处理 | 采样时间窗(分娩后1小时内);采样部位(外周和中央子叶混合);冻存条件(液氮速冻后-80°C) 阅读提示:Methods中Participants and Placenta Tissue小节 |
| 脂质提取 | 组织用量(约50±5mg);内标浓度和种类;提取溶剂比例和体积;复溶和稀释步骤 阅读提示:Methods中Lipid Extraction小节 |
| LC-MS/MS分析 | 色谱柱型号和温度;流动相组成和梯度;流速;进样体积;质谱参数(详见补充材料) 阅读提示:Methods中Mass Spectrometry小节及Supplemental Materials |
| Western blot | 上样量(20μg);抗体稀释比例;封闭条件;检测方法 阅读提示:Methods中Western Blotting小节 |
| 数据分析 | 数据预处理参数(80%规则、缺失值插补方法);统计阈值(FDR校正p<0.05,|log2FC|≥0.58);AUROC解释标准 阅读提示:Methods中Data Processing and Analysis小节 |