患者队列与临床病理特征收集
建立葡萄膜黑色素瘤研究队列并获取临床、分子及组织病理数据
纳入403例1965-2025年诊断的UM患者,收集年龄、性别、AJCC TNM分期、细胞类型,并通过FISH分析染色体3和8q状态。
PRAME predicting outcome in uveal melanoma
403例UM队列,IHC检测PRAME/BAP1及FISH,生存分析,但仅一种主要实验体系,无功能验证。
403例葡萄膜黑色素瘤患者FFPE肿瘤组织 组织芯片(TMA) 全肿瘤切片
PRAME IHC阳性阈值:>10%肿瘤细胞核染色 BAP1 IHC阳性阈值:>50%肿瘤细胞核染色 PRAME IHC在TMA与全切片上的结果差异 多变量Cox模型中调整年龄、AJCC分期和BAP1状态
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
建立葡萄膜黑色素瘤研究队列并获取临床、分子及组织病理数据
纳入403例1965-2025年诊断的UM患者,收集年龄、性别、AJCC TNM分期、细胞类型,并通过FISH分析染色体3和8q状态。
构建用于免疫组化染色的肿瘤组织样本
使用手动组织阵列仪构建TMA,每个肿瘤取三个600μm核心,并包含非肿瘤参考样本;全组织切片厚度4μm。
检测肿瘤组织中PRAME和BAP1蛋白表达
在Ventana Benchmark Ultra自动平台上使用碱性磷酸酶红色检测系统进行IHC,一抗为BAP1(1:50)和PRAME(克隆EPR20330,32分钟37°C),核复染使用Harris苏木精。
确定PRAME和BAP1表达状态
由两名不知患者结局的观察者独立评分,PRAME阳性为>10%肿瘤细胞核染色,BAP1阳性为>50%肿瘤细胞核染色,分歧通过共识解决。
评估PRAME表达与总生存期和无转移生存期的关联
使用Kaplan-Meier曲线和log-rank检验,以及单变量和多变量Cox比例风险模型分析OS和MFS。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 组织芯片构建 | 手动组织阵列仪 | Beecher Instruments | -- |
| 免疫组化染色 | Ventana Benchmark Ultra自动染色平台 | Ventana Medical Systems | -- |
| BAP1抗体 | Santa Cruz Biotechnology | sc-28383 | |
| PRAME抗体 | Biocare Medical | AVI3252G | |
| 荧光原位杂交 | Vysis CEP 3探针 | Abbott Molecular Inc. | 06J36-013 |
| ZytoLight SPEC MYC/CEN 8双色探针 | ZytoVision GmbH | Z-2092 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| PRAME IHC评分 | 阳性阈值>10%肿瘤细胞核染色;TMA与全切片结果差异显著,需明确样本类型 阅读提示:Methods: Immunohistochemical staining and scoring |
| BAP1 IHC评分 | 阳性阈值>50%肿瘤细胞核染色 阅读提示:Methods: Immunohistochemical staining and scoring |
| 生存分析 | 多变量模型调整年龄、AJCC分期、BAP1状态;OS和MFS定义 阅读提示:Methods: Statistical analysis; Results |
| FISH分析 | 染色体3和8q探针及评分标准 阅读提示:Methods: Cytogenic analysis |