患者队列与临床信息收集
建立结直肠癌患者样本队列并获取临床病理及分子特征，用于后续靶点表达相关性分析。
回顾性分析2016至2025年间在湖北省肿瘤医院经病理确诊的193例中国结直肠腺癌患者肿瘤标本，收集人口学信息、治疗详情和疗效，以及KRAS、BRAF和MMR状态等分子分型数据。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
分析EGFR、c-MET和B7H3共表达以指导结直肠癌下一代双药偶联策略
Profiling EGFR, c-MET, and B7H3 co-expression to guide next-generation dual-drug conjugate strategies in colorectal cancer
实验完整度
高包含193例患者样本IHC检测和TIMER数据库mRNA表达与生存分析，涵盖蛋白与RNA两个独立证据层级。
主要模型
193例中国结直肠腺癌患者肿瘤组织样本 TIMER数据库结直肠癌RNA表达与预后队列
重点核对
B7H3、c-MET、EGFR阳性定义：H-score ≥100 c-MET IHC使用CONFIRM anti-Total c-MET (SP44) 兔单克隆抗体（#790-4430）在Ventana Benchmark Ultra平台检测 B7H3抗体分别使用D9M2L（#14058）和SP206（ab227670）评估胞内与胞外表位染色差异 AI辅助数字病理c-MET评分与病理学家评分在40例样本中验证一致性 CD276高表达与CRC患者总生存期较差相关，HR为1.406（95% CI, 1.033–1.914）
摘要
表皮生长因子受体（EGFR）、细胞间质-上皮转化因子（c-MET）和B7同源物3（B7H3）是结直肠癌（CRC）中基于抗体的药物开发的重要靶点。为克服单靶点抗体疗法的局限性——如疗效有限、广泛耐药、患者人群狭窄和治疗相关毒性——各种靶向两个靶点的双特异性抗体或抗体-药物偶联物（ADC）正在临床环境中被广泛验证。更深入地了解可操作治疗靶点的表达谱和共表达模式可能指导更有效的治疗策略。我们在193例CRC患者队列中评估了B7H3、c-MET和EGFR的免疫组化表达。其中，B7H3在CRC组织中表现出最高的阳性率（80.83%），其次是c-MET（77.20%）和EGFR（47.15%）。B7H3阳性率在患者性别、年龄、TNM分期、分化等级或肿瘤部位之间无显著差异。相反，c-MET阳性率在I-II期疾病患者中升高，而EGFR的表达在女性患者中显著高于男性患者。对转移病灶中三个靶点的同时评估显示，B7H3表达水平在原发性和转移性肿瘤之间相当，而c-MET表达在原发病灶中显著更高。共表达分析表明，患者覆盖率最高的组是B7H3/c-MET双阳性组，其次是B7H3/EGFR和c-MET/EGFR组合，且至少有一个阳性靶点的患者比例超过80%。最后，来自TIMER数据库的mRNA谱显示，CRC肿瘤组织中CD276和MET的表达高于大多数正常组织。因此，利用整合细胞内信号抑制与免疫检查点调节的B7H3/c-MET联合疗法，可能将治疗获益扩展到更广泛的CRC患者。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 结直肠癌中B7H3、c-MET和EGFR的表达与共表达模式如何，能否据此指导更有效的双靶点联合治疗策略？
- 核心机制
- B7H3/c-MET共表达覆盖率最高，且c-MET与B7-H3存在功能互作并可激活c-Met/STAT3通路；但c-MET缺失导致B7-H3上调的补偿机制尚属假设，具体机制有待研究。
- 主要证据
- 193例CRC患者IHC显示B7H3阳性率80.83%、c-MET 77.20%、EGFR 47.15%，B7H3/c-MET双阳性覆盖率最高，至少一个靶点阳性患者超80%；TIMER数据库显示CD276和MET在CRC肿瘤中高表达，CD276高表达与较差OS相关。
- 研究意义
- B7H3/c-MET共表达谱可能为B7H3/c-MET联合治疗提供新见解，并可能将治疗获益扩展至更广泛的CRC患者。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
免疫组化检测三个靶点表达
评估B7H3、c-MET和EGFR在CRC组织中的蛋白表达水平和阳性率。
组织经10%福尔马林固定、梯度乙醇脱水、石蜡包埋后3 μm切片。c-MET使用CONFIRM anti-Total c-MET (SP44) 兔单克隆抗体在Ventana Benchmark Ultra平台检测，B7H3和EGFR在Leica Bond III平台检测。由两名盲法病理学家独立评估部分或完全细胞膜染色，染色强度分为0、1+、2+、3+，采用H-score半定量，阳性定义为H-score ≥100。
AI辅助数字病理c-MET评分验证
验证AI辅助数字病理评估c-MET表达的可靠性，并用于后续c-MET评分。
使用Aperio CS2扫描仪20×扫描切片，HALO和HALO AI图像分析软件进行肿瘤区域识别、细胞分割与分类及c-MET膜染色强度定量和H-score生成。随机选取40例样本进行独立病理复核，以H-score差异≤30为一致性阈值。
靶点表达与临床病理及分子特征相关性分析
分析B7H3、c-MET和EGFR表达与患者性别、年龄、TNM分期、分化、部位及KRAS/BRAF/MMR状态的相关性。
使用χ2检验评估三个靶点表达与临床特征关联；使用GraphPad Prism 10进行分子特征相关分析，包括非配对t检验、配对t检验、Pearson和Spearman相关分析。同时比较原发灶与转移灶中三个靶点的表达差异。
TIMER数据库RNA表达与生存分析
系统探索B7H3、c-MET和EGFR在泛癌组织中的RNA表达特征及其与CRC患者总生存期的关联。
使用TIMER数据库分析CD276、MET和EGFR的泛癌RNA表达谱及预后价值，比较CRC肿瘤组织与邻近正常组织的表达差异，并分析CD276表达与总生存期的关系。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 免疫组化 | CONFIRM抗总c-MET (SP44) 兔单克隆一抗 | Ventana Medical Systems | 790-4430 |
| ultraView通用DAB检测试剂盒 | Ventana Medical Systems | 760-500 | |
| Bond聚合物精炼检测试剂盒 | Leica Biosystems | DS9800-CN | |
| B7H3抗体 (D9M2L) | Cell Signaling Technology | 14058 | |
| B7H3抗体 (SP206) | Abcam | ab227670 | |
| EGFR抗体 | Cell Signaling Technology | 4267S | |
| 数字病理扫描 | Aperio® CS2切片扫描仪 | Leica Biosystems | -- |
| 数字病理分析 | HALO®和HALO AI®图像分析软件 | Indica Labs | v4.1.5944.161 |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 患者队列与样本纳入 | 样本来源：2016-2025年湖北省肿瘤医院193例中国结直肠腺癌患者；诊断标准：2026年WHO分类；分期标准：AJCC TNM；伦理批号LCKY2024005 阅读提示：Methods中Ethics statement and patient consent小节 |
| 免疫组化染色与评分 | c-MET抗体克隆号SP44及货号#790-4430；B7H3抗体D9M2L (#14058)与SP206 (ab227670)；EGFR抗体#4267S；阳性阈值H-score ≥100；两名盲法病理学家独立评分 阅读提示：Methods中Immunohistochemistry evaluation小节及Figure 1 |
| AI辅助数字病理c-MET评分 | 扫描仪Aperio CS2 20×；分析软件HALO v4.1.5944.161；DAB检测阈值调整范围0.1-0.4；40例验证样本；一致性阈值≤30 H-score 阅读提示：Methods中Digital analysis小节及Figure 2 |
| 临床病理与分子特征相关性分析 | 统计软件R 4.4.1和GraphPad Prism 10；显著性p<0.05；检验方法χ2检验、非配对t检验、配对t检验、Pearson和Spearman相关分析；KRAS/BRAF/MMR状态来源 阅读提示：Methods中Statistical methods小节及Table 1、Figure 5 |
| TIMER数据库生存分析 | 数据库TIMER；CD276 HR 1.406 (95% CI, 1.033–1.914)；MET HR 1.033 (95% CI, 0.809–1.319)；EGFR HR 1.269 (95% CI, 0.996–1.616) 阅读提示：Results中Association between specific target RNA levels and survival outcomes in CRC小节及Figure 6 |