稀疏细胞标记揭示小鼠巩膜成纤维细胞的形态多样性

目的：本研究旨在探究健康及眼压升高眼中小鼠巩膜细胞的形态。方法：将B6.Cg-Ndor1Tg(UBC-cre/ERT2)1Ejb/1J（UBC-Cre-ERT2）（品系号007001；Jackson Labs, Bar Harbor, ME, USA）与Gt(ROSA)26 Sor tm1(CAG-Brainbow2.1)Cle/J（R26R-Confetti）（品系号017492，Jackson Labs）杂交获得半合子后代（UBC-Confetti）。这允许他莫昔芬诱导Brainbow 2.1 cassette重组，在所有细胞中随机表达荧光蛋白。他莫昔芬处理（腹腔注射，n = 7只小鼠）两周后，前房微珠注射升高眼压（IOP）。微珠注射后3天摘除眼球。对YFP和GFP标记的视盘周围巩膜（PPS）和周边巩膜细胞进行成像，测量细胞体积，并使用Imaris（版本9.3；89个对照细胞和136个青光眼细胞）突出显示单个细胞形态。结果：YFP/GFP标记细胞的成像使得能够可视化单个巩膜细胞。与核和纤维状肌动蛋白（FA）标记相比，Confetti YFP/GFP信号强度的差异使得能够在YFP/GFP标记细胞内可视化FA和核结构。在基线条件下，细胞形态多样，显示迁移结构和延伸至周围细胞外基质（ECM）。平均PPS细胞体积（692 µm³，四分位距[IQR] = 419.8–1304 µm³，n = 62个细胞）大于周边细胞体积（336 µm³，IQR = 217–488 µm³，n = 27个细胞，P < 0.0001）。青光眼眼中的细胞表现出相似的形态多样性，且与对照组相比PPS细胞体积减小（277 µm³，IQR = 154–532，n = 83个细胞，P < 0.0001）。结论：稀疏细胞标记使得能够在巩膜环境中可视化单个细胞形态。细胞表现出多样的形态，且PPS细胞对IOP升高有响应。