预试验与随机分组
确定参与者身体特征、最大力量及基线膳食摄入,并进行随机分组
测量身高、体重、血压、体成分(双能X射线吸收法)、静息代谢率、腿举和腿屈伸10RM,并通过24小时膳食回顾评估习惯性膳食摄入;使用按性别分层的区组随机化将参与者分配至HFP、LFP或CHO条件。
Ingestion of a lipid-rich meat matrix blunts the postexercise increase of myofibrillar protein synthesis rates in healthy adults: a randomized controlled trial
随机对照试验,含人体代谢输注、多次肌肉活检、Western blot及线性混合效应模型分析
身体活跃的健康年轻成人(12男4女)
L-[ring-13C6]苯丙氨酸预充-恒定输注(预充:2 μmol/kg;0.05 μmol/kg/min) 急性抗阻运动:腿举和腿屈伸各4组×10次,强度为90% 10RM 三种膳食条件:HFP(109.6 g,266 kcal,20 g蛋白质,20.6 g脂肪)、LFP(90.2 g,120 kcal,20 g蛋白质,4.4 g脂肪)、CHO(76.6 g,266 kcal,73.3 g碳水化合物) 肌肉活检:静息时(t=-30 min)及运动后0-5小时恢复期重复采集 样本量:16名参与者(14人完成两次输注试验,2人完成一次),每个条件n=10
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
确定参与者身体特征、最大力量及基线膳食摄入,并进行随机分组
测量身高、体重、血压、体成分(双能X射线吸收法)、静息代谢率、腿举和腿屈伸10RM,并通过24小时膳食回顾评估习惯性膳食摄入;使用按性别分层的区组随机化将参与者分配至HFP、LFP或CHO条件。
在稳定同位素输注下进行抗阻运动,以评估运动后MPS反应
隔夜空腹后,插入静脉导管,开始L-[ring-13C6]苯丙氨酸预充-恒定输注;在静息肌肉活检后,进行急性抗阻运动(腿举和腿屈伸各4组×10次,90% 10RM);运动后摄入指定膳食条件;在0-5小时恢复期重复采集血液和肌肉样本。
测量血浆葡萄糖、胰岛素、氨基酸、游离脂肪酸浓度及肌原纤维蛋白合成速率
使用ELISA测定血浆胰岛素,自动生化分析仪测定葡萄糖,LC-MS/MS测定氨基酸浓度和富集度,LC-MS测定游离脂肪酸;从肌肉样本中提取肌原纤维蛋白富集分数,通过同位素富集计算分数合成率。
评估食物基质/脂质组成对运动诱导合成代谢信号通路的影响
使用Western blot分析肌肉匀浆中p70S6K(Thr389)、4E-BP1(Thr37/46)、Akt(Ser473/Thr308)和AMPKα(Thr172)的磷酸化水平。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 预试验 | HEM-907XL自动血压计 | Omron Healthcare Inc. | HEM-907XL |
| QDR 4500A双能X射线吸收仪 | Hologic | QDR 4500A | |
| 血浆分析 | 胰岛素酶联免疫吸附测定试剂盒 | Alpco Diagnostics | -- |
| 2900 Stat Plus自动生化分析仪 | YSI Life Sciences | 2900 Stat Plus | |
| 5500 QTRAP质谱仪 | SCIEX | 5500 QTRAP | |
| 1290 Infinity II液相色谱系统 | Agilent Technologies, Inc. | 1290 Infinity II | |
| Hypersil GOLD C18色谱柱 | ThermoFisher Scientific | 3 × 150 mm, 3 μm | |
| 6495C三重四极杆质谱仪 | Agilent | 6495C | |
| Waters ACQUITY Premier BEH C18色谱柱 | Waters | 1.7 μm × 2.1 × 150 mm | |
| 肌肉分析 | Pierce RIPA缓冲液 | ThermoFisher Scientific | -- |
| cOmplete蛋白酶抑制剂片剂 | Roche Applied Science | -- | |
| PhosSTOP磷酸酶抑制剂片剂 | Roche Applied Science | -- | |
| Western blot | 兔抗α-微管蛋白抗体 | Cell Signaling | 2144 |
| 兔抗磷酸化核糖体蛋白S6激酶β1(p70S6K; Thr389)抗体 | Cell Signaling Technology | 9205 | |
| 兔抗p70S6K抗体 | Cell Signaling Technology | 9202 | |
| 兔抗磷酸化核糖体蛋白4E-BP1(Thr37/46)抗体 | Cell Signaling Technology | 9459 | |
| 兔抗4E-BP1抗体 | Cell Signaling Technology | 9452 | |
| 兔抗磷酸化Akt(Ser473)抗体 | Cell Signaling | 9271 | |
| 兔抗磷酸化Akt(Thr308)抗体 | Cell Signaling | 4056 | |
| 兔抗Akt抗体 | Cell Signaling | 9272 | |
| 兔抗磷酸化AMPKα(Thr172)抗体 | Cell Signaling | 2531 | |
| 磷酸化AMPKα(Thr172)抗体 | Cell Signaling | 2532 | |
| 膳食处理 | 佳得乐饮料 | PepsiCo | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 参与者与伦理 | 样本量:16名(12男4女);14人完成两次输注试验,2人完成一次;纳入标准:Godin-Shepherd评分>14且IPAQ>1500,体重稳定至少6个月 阅读提示:Methods小节“Participants and ethical approval”及Figure 1 CONSORT流程图 |
| 实验设计 | 设计类型:随机、半交叉设计,参与者完成3种条件中的2种;洗脱期:9.8 ± 5.2天;随机化:按性别分层的区组随机化 阅读提示:Methods小节“Experimental design”及“Pretesting” |
| 输注方案与运动 | 输注剂量:L-[ring-13C6]苯丙氨酸预充2 μmol/kg,恒定0.05 μmol/kg/min;运动方案:腿举和腿屈伸各4组×10次,90% 10RM;肌肉活检时间点:静息(t=-30 min)及运动后0-5小时 阅读提示:Methods小节“Infusion protocol”及Figure 2实验设计示意图 |
| 膳食条件 | HFP:109.6 g,266 kcal,20 g蛋白质,20.6 g脂肪;LFP:90.2 g,120 kcal,20 g蛋白质,4.4 g脂肪;CHO:76.6 g,266 kcal,73.3 g碳水化合物;猪肉烹饪条件:200°C约30分钟或内部温度达75°C 阅读提示:Methods小节“Treatment conditions”及Table 2营养组成 |
| 血浆与肌肉分析 | 血浆氨基酸和富集度:LC-MS/MS(LOQ:2–2000 ng/mL和0.75–2000 ng/mL);血浆FFA:LC-MS(LOQ:2.5–5000 ng/mL);肌肉样本:约50 mg湿重,RIPA缓冲液裂解;Western blot抗体稀释比例:均为1:1000 阅读提示:Methods小节“Plasma analyses”和“Muscle analyses” |