小鼠体内连续传代获得适应毒株
获得在免疫健全C57BL/6小鼠中具有增强致病性的YEZV适应株
将YEZV T-HLJ01株腹腔接种3周龄雄性C57BL/6小鼠，每代在3 dpi采集肝脏匀浆并继续腹腔接种下一只小鼠，连续传代30代
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致死性C57BL/6小鼠模型用于Yezo病毒感染及抗病毒治疗评估
Lethal C57BL/6 mouse model for Yezo virus infection and antiviral therapeutic evaluation
实验完整度
高包含小鼠体内传代模型、病毒滴度、临床病理、组织病理、免疫组化及抗病毒药效验证等多个独立证据层级
主要模型
C57BL/6小鼠（3周龄，雌雄各半） Vero细胞 小鼠适应YEZV P30株
重点核对
小鼠适应毒株：YEZV T-HLJ01经C57BL/6小鼠连续30代传代获得P30株 感染剂量：腹腔接种1×10²或1×10⁴ PFU YEZV 样本采集时间点：3、7、15 dpi安乐死并采集血液、拭子和组织 抗病毒给药方案：法匹拉韦或利巴韦林100或300 mg/kg/day，口服灌胃，每日一次，连续7天，起始于0、1或3 dpi 病毒载量检测：RT-qPCR定量组织中病毒RNA拷贝数，Ct值>40判定为阴性
摘要
Yezo病毒（YEZV）是一种新发蜱传正内罗病毒，可引起人类发热性疾病和肝损伤。然而，其发病机制和有效的抗病毒干预措施仍表征不足。本研究通过连续30代在C57BL/6小鼠中传代，获得了致死性小鼠适应YEZV毒株。该适应毒株成功重现了人类YEZV感染的关键临床和病理特征，包括白细胞减少、血小板减少和肝炎，表现为血清转氨酶升高、肝脏病毒载量高以及组织病理学坏死性炎性病变。值得注意的是，雌性小鼠的死亡率显著高于雄性，揭示了疾病易感性的性别相关差异。抗病毒评估表明，法匹拉韦和利巴韦林均显著抑制了体内YEZV复制、提高了生存率并降低了肝脏病毒载量。总体而言，该模型建立了一个严格验证的平台，用于YEZV发病机制研究和抗病毒治疗药物的临床前评估。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 如何建立免疫健全小鼠的致死性Yezo病毒感染模型，并评估法匹拉韦和利巴韦林的体内抗病毒疗效？
- 核心机制
- YEZV P30株通过连续传代获得增强的肝脏嗜性和致病性，在雌性C57BL/6小鼠中诱导更严重的疾病和死亡；法匹拉韦和利巴韦林通过抑制病毒复制减轻肝脏病毒载量并改善生存。
- 主要证据
- P30株在C57BL/6小鼠中重现人类YEZV感染的临床和病理特征，包括白细胞减少、血小板减少、肝酶升高和肝脏坏死性炎性病变；高剂量（300 mg/kg/day）法匹拉韦和利巴韦林治疗使所有小鼠存活，并显著降低血液和组织中的病毒载量。
- 研究意义
- 该模型为YEZV发病机制研究和抗病毒治疗药物的临床前评估提供了经过验证的平台，并支持法匹拉韦和利巴韦林作为YEZV感染候选治疗药物的进一步开发。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
P1和P30株致病性比较
评估P1和P30株在C57BL/6小鼠中的致病性和致死性差异
3周龄C57BL/6小鼠（每组每性别n=6）腹腔接种1×10²或1×10⁴ PFU的P1或P30株，监测15天生存率和体重变化
病毒载量动态检测
比较P1和P30株在血液和组织中的复制动态和组织嗜性
小鼠腹腔接种1×10⁴ PFU YEZV后，在3、7、15 dpi安乐死，采集血液、喉拭子、肛拭子及脑、心、肾、肝、脾、肺、小肠、睾丸等组织，通过RT-qPCR定量病毒RNA拷贝数
组织病理学和血液学分析
评估YEZV感染引起的组织病理损伤和血液学变化
小鼠腹腔接种1×10⁴ PFU YEZV后，在5 dpi安乐死，采集肝脏和脾脏进行H&E染色和免疫组化检测YEZV N蛋白，同时进行全血细胞计数和血清生化分析
抗病毒药物体内药效评估
评估法匹拉韦和利巴韦林对致死性YEZV感染的体内保护效果
雌性C57BL/6小鼠（n=6）腹腔接种1×10⁴ PFU YEZV P30株后，在0、1或3 dpi起始口服灌胃法匹拉韦或利巴韦林（100或300 mg/kg/day），每日一次连续7天，监测15天生存率和体重变化
抗病毒治疗后病毒载量检测
评估法匹拉韦和利巴韦林对体内病毒复制的抑制效果
雌性C57BL/6小鼠腹腔接种1×10⁴ PFU YEZV P30株后，在0 dpi起始口服灌胃300 mg/kg/day法匹拉韦或利巴韦林，每日一次连续5天，在3、7、15 dpi安乐死（n=3），采集血液和组织通过RT-qPCR定量病毒RNA拷贝数
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 小鼠体内传代 | DMEM培养基 | -- | -- |
| 病毒滴度测定 | Bodboge血细胞计数板 | Bodboge | -- |
| 结晶紫 | -- | -- | |
| RNA提取 | TIANamp病毒RNA提取试剂盒 | TIANGEN | -- |
| 逆转录 | PrimeScript™ RT试剂盒（含gDNA Eraser） | TaKaRa | -- |
| RT-qPCR | Premix Ex Taq™（探针qPCR）试剂盒 | TaKaRa | -- |
| 免疫组化 | 即用型快速免疫组化MaxVision™ HRP试剂盒 | Maixin | -- |
| DAB显色底物 | -- | -- | |
| 抗病毒药物处理 | 法匹拉韦 | RHAWN | -- |
| 利巴韦林 | RHAWN | -- | |
| 甲基纤维素 | -- | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 小鼠适应株传代 | 小鼠品系、周龄、性别、接种剂量（1×10⁴ PFU）、接种途径（腹腔）、传代间隔（3天）、传代次数（30代） 阅读提示：Methods 'In vivo passage of YEZV in mice'部分 |
| P1和P30株致病性比较 | 小鼠周龄（3周龄）、每组每性别样本量（n=6）、接种剂量（1×10²或1×10⁴ PFU）、接种途径（腹腔）、监测时间（15天） 阅读提示：Methods 'Experimental infection of mice with YEZV'部分及Figure 1图注 |
| 病毒载量动态检测 | 接种剂量（1×10⁴ PFU）、采集时间点（3、7、15 dpi）、每组每时间点样本量（n=3每性别）、检测方法（RT-qPCR） 阅读提示：Methods 'RNA extraction and RT-qPCR detection'部分及Figure 2图注 |
| 抗病毒药物体内药效评估 | 小鼠性别（雌性）、每组样本量（n=6）、接种剂量（1×10⁴ PFU）、治疗起始时间（0、1或3 dpi）、给药剂量（100或300 mg/kg/day）、给药途径（口服灌胃）、给药频率（每日一次，连续7天）、溶剂对照（0.5%甲基纤维素） 阅读提示：Methods 'In vivo antiviral assay'部分及Figure 4图注 |
| 抗病毒治疗后病毒载量检测 | 小鼠性别（雌性）、每组样本量（n=3）、治疗剂量（300 mg/kg/day）、治疗起始时间（0 dpi）、给药频率（每日一次，连续5天）、采集时间点（3、7、15 dpi） 阅读提示：Results 'Viral loads in antiviral-treated mice'部分及Figure 5图注 |