FRICT-ION模型建立
建立CBZ敏感的三叉神经痛小鼠模型。
通过眶下神经颅内慢性压迫性损伤,在foramen rotundum处植入4根铬肠线及surgifoam,增强三叉神经V2颅内压迫。
Manual and automated capture of analgesic-responsive facial pain behaviors of unrestrained mice in a trigeminal neuralgia model
包含不受限小鼠行为学、DLC自动化分析、免疫组化及多种药物验证,具备功能与机制验证。
C57BL/6小鼠颅内FRICT-ION三叉神经痛模型 不受限小鼠高帧率视频行为评估体系 DeepLabCut自动追踪分析体系
cbz剂量60 mg/kg腹腔注射,测试前30分钟给药 L-Baclofen剂量2 mg/kg腹腔注射,测试前30分钟给药 PS75剂量5 mg/kg腹腔注射,测试前30分钟给药 Meloxicam剂量5 mg/kg腹腔注射,测试前30分钟给药 BIBN 4096剂量5 mg/kg腹腔注射,测试前30分钟给药
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
建立CBZ敏感的三叉神经痛小鼠模型。
通过眶下神经颅内慢性压迫性损伤,在foramen rotundum处植入4根铬肠线及surgifoam,增强三叉神经V2颅内压迫。
捕捉不受限小鼠自发性和诱发性面部疼痛行为。
使用遮蔽管法将小鼠置于定制丙烯酸管中,以单色相机和红外镜头进行高帧率视频记录,同步记录von Frey丝强度和刺激次数。
通过人工评分检测损伤诱导的慢性面部疼痛行为。
由盲法观察者分析视频,评估自发不对称理毛和诱发面部摩擦(理毛和擦拭总和),并采用grimace scale和OPAD评估。
自动捕捉von Frey刺激后头部运动速度作为持续性疼痛相关指标。
使用DLC v3.0训练神经网络追踪鼻、爪、胡须垫和眼睑关键点,计算刺激后15秒内头部运动速度。
验证行为测量对临床TN镇痛药反应的预测能力。
腹腔注射CBZ、L-Baclofen、PS75、Meloxicam或BIBN 4096,30分钟后测试自发和诱发行为。
检测FRICT-ION模型是否伴随慢性神经免疫激活。
免疫组化检测三叉神经V2、三叉神经节和TNC中PU.1、IBA1、NF200和ATF3表达。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物模型建立 | 手术丝线 | Ethicon | 6.0 |
| 铬肠线 | Ethicon | 4.0 | |
| 明胶海绵 | 文中未明确说明 | -- | |
| Dumont 5/45镊子 | FST | #11251-35 | |
| BRI #10-1725镊子 | BRI | #10-1725 | |
| 3M Vetbond组织胶 | 3M | #1469SB | |
| 行为学记录 | 定制抬高丙烯酸透明管 | TAP Plastic | SKU#23353-CTS |
| 单色相机 | The Imagingsource | DMK 37BUX252 | |
| 红外C-Mount镜头 | Tamron | BH #TA41212ML; MFR #12VM412ASIR | |
| 药物治疗 | 卡马西平 | 文中未明确说明 | -- |
| L-巴氯芬 | 文中未明确说明 | -- | |
| PS75 | 文中未明确说明 | -- | |
| 美洛昔康 | 文中未明确说明 | -- | |
| BIBN 4096 | 文中未明确说明 | -- | |
| 2-羟丙基β-环糊精 | 文中未明确说明 | -- | |
| 免疫组化 | 兔抗PU1抗体 | Cell Signaling | #2266 |
| 兔抗IBA1抗体 | Wako | #019-19741 | |
| 小鼠抗NF200抗体 | Sigma | #N5389 | |
| 兔抗ATF3抗体 | Sigma-Aldrich | #HPA001562 | |
| Alexa Fluor 488荧光二抗 | ThermoFisher Scientific | -- | |
| Alexa Fluor 555荧光二抗 | ThermoFisher Scientific | -- | |
| Alexa Fluor 594荧光二抗 | ThermoFisher Scientific | -- | |
| Alexa Fluor 647荧光二抗 | ThermoFisher Scientific | -- | |
| Carl Zeiss LSM 700显微镜 | Carl Zeiss | LSM 700 | |
| OPAD测试 | 口面部疼痛评估装置笼 | Stoelting | -- |
| Ensure Original营养奶昔 | Abbott Laboratories | -- | |
| Rotarod测试 | 加速转棒仪 | Ugo Basile | Model #7650 |
| 高架十字迷宫 | 高架十字迷宫 | Kinder Scientific | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| FRICT-ION模型建立 | 铬肠线数量4根、长度3-4 mm;植入位置foramen rotundum;术后软食喂养 阅读提示:Methods 2.2 Surgery |
| 不受限行为记录 | 相机帧率60 fps;von Frey丝强度0.02 g或0.04 g;每侧刺激5次,间隔30-60秒;刺激前habituation 10分钟 阅读提示:Methods 2.3和2.4.1,Figure 1C,Figure 2 |
| DeepLabCut追踪 | DLC v3.0;RestNet-50;20轮训练,1000 epochs,batch size 16;头部运动速度计算窗口为刺激后15秒 阅读提示:Methods 2.4.6,Figure 2D-G |
| 药物处理与行为测试 | CBZ 60 mg/kg、L-Baclofen 2 mg/kg、PS75 5 mg/kg、Meloxicam 5 mg/kg、BIBN 4096 5 mg/kg;腹腔注射;给药后30分钟测试;溶媒组成 阅读提示:Methods 2.5,Figure 3 |
| 免疫组化 | 抗体稀释比例:anti-PU1 1:500,anti-IBA1 1:2000,anti-NF200 1:1000,anti-ATF3 1:500;灌注固定条件 阅读提示:Methods 2.6,Figure 4 |