患者入组与临床分层
建立覆盖不同疾病严重程度的肝硬化合并血小板减少症患者队列
纳入81例肝硬化合并血小板减少症患者，按Child-Pugh A、B/C无感染、B/C合并细菌感染分为三组，进行临床和实验室特征采集
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一种用于评估肝硬化合并血小板减少症患者止血功能的自动化微流控系统
An Automated Microfluidic System for Haemostasis Assessment in Cirrhosis With Thrombocytopenia
实验完整度
高包含患者队列、T-TAS和ROTEM体外功能检测、重复性分析和回归分析。
主要模型
81例肝硬化合并血小板减少症患者队列 Child-Pugh A、B/C及B/C合并细菌感染三组患者
重点核对
T-TAS参数（OST、OT、AUC）在81例患者中重复测量的组内相关系数≥0.90（p<0.001），血小板<50×10⁹/L亚组亦然。 T-TAS参数在Child-Pugh A、B/C、B/C+感染三组间的趋势：OT显著延长（p=0.032），AUC显著降低（p=0.025）。 多因素分析显示血小板计数（OT：B=-0.057，p=0.003；AUC：B=2.553，p=0.018）和FVIII（OT：B=-0.017，p=0.041）为独立决定因素。 ROTEM主要参数（CT、CFT、MCF）与T-TAS参数显著相关（p<0.05）。 分段回归显示血小板30-50×10⁹/L区间OT斜率（B=-0.17，p=0.064）与>50×10⁹/L区间（B=-0.039，p=0.051）。
摘要
背景与目的：常规实验室检查无法捕捉体内发生的血小板-血管壁相互作用（初级止血），限制了侵入性操作前的指导。这在以晚期肝硬化标志的血小板减少症患者中尤为重要。微流控检测可能克服这些局限。Total Thrombus Analysis System（T-TAS）是一种流动腔室，配备HD-CHIP后可适用于血小板减少样本。CirTAS研究旨在评估T-TAS的重复性及其识别肝硬化合并血小板减少症患者疾病严重程度梯度的能力。方法：纳入81例肝硬化合并血小板减少症患者（20例Child-Pugh A、41例B/C、20例B/C合并细菌感染）。使用HD-CHIP进行T-TAS测量。通过组内相关系数评估重复性。同步分析血栓弹力计量（ROTEM）参数。采用多因素和分段回归分析检验影响T-TAS参数的因素。结果：T-TAS显示高重复性，所有参数的组内相关系数约为0.90（p<0.001），即使在血小板计数<50×10⁹/L时亦然。流动下血栓形成随临床状况恶化和细菌感染存在而下降（p<0.05）。同时，ROTEM显示随疾病严重程度增加而趋向低凝，并与T-TAS参数相关。血小板计数和因子VIII（FVIII）是最具代表性T-TAS参数的独立决定因素。探索性分析检测到在30-50×10⁹/L时血小板计数-T-TAS关联更强的趋势。结论：T-TAS在血小板减少性肝硬化中具有重复性，并与疾病进展和细菌感染伴随的血栓形成减少相关。血小板计数和FVIII是通过T-TAS评估的血栓形成的主要决定因素。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 在肝硬化合并血小板减少症患者中，配备HD-CHIP的T-TAS能否提供可重复的初级止血评估，并捕捉疾病严重程度梯度？
- 核心机制
- 在高剪切流动条件下，血小板计数和FVIII是血栓形成的主要独立决定因素，疾病严重程度和细菌感染与流动下血栓形成减少相关。
- 主要证据
- 81例患者队列的T-TAS测量显示高重复性（ICC≥0.90）；OT随疾病严重程度显著延长、AUC显著降低；多因素分析确认血小板计数和FVIII的独立关联；ROTEM参数与T-TAS相关。
- 研究意义
- T-TAS联合HD-CHIP是评估肝硬化初级止血的候选实验室工具，有望用于血小板减少性肝硬化患者侵入性操作前的出血风险分层，但仍需前瞻性验证。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
T-TAS HD-CHIP测量
评估流动条件下初级止血功能并检测疾病严重程度梯度
使用HD-CHIP微流控芯片，以柠檬酸盐抗凝全血复钙并加入玉米胰蛋白酶抑制剂后，以1200 s⁻¹剪切率灌流，通过压力传感器实时监测血栓形成，记录OST、OT、AUC三个参数
ROTEM对比检测
与T-TAS进行对比，评估整体止血状态
使用ROTEM Delta系统，EXTEM或INTEM试剂盒检测柠檬酸盐全血，记录CT、CFT、MCF标准参数
附加止血和炎症标志物检测
评估VWF、凝血因子、血小板活化标志物和细菌易位标志物水平
检测VWF:Ag、VWF:RCo、FVIII、蛋白C、纤维蛋白原、LBP、sCD40L、P-选择素等
重复性分析
评估T-TAS HD-CHIP测量的重复性和准确性
对T-TAS参数进行重复测量，计算Spearman相关系数、组内相关系数（ICCa和ICCc）和Bland-Altman图
疾病梯度分析和影响因素分析
评估T-TAS识别疾病严重程度梯度的能力，并确定影响血栓形成的独立因素
采用Jonckheere-Terpstra检验进行组间比较，单因素和多因素线性回归分析影响因素，分段线性回归探索血小板阈值效应
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 微流控血栓形成分析 | 全血栓分析系统设备 | Zacros | -- |
| HD-CHIP芯片 | Zacros | -- | |
| 猪源I型胶原 | -- | -- | |
| 兔源组织因子 | -- | -- | |
| 氯化钙 | -- | -- | |
| 玉米胰蛋白酶抑制剂 | -- | -- | |
| 整体凝血功能检测 | ROTEM Delta系统 | -- | -- |
| EXTEM试剂盒 | -- | -- | |
| INTEM试剂盒 | -- | -- | |
| 数据分析与统计 | SPSS Statistics 29版 | IBM Corp. | -- |
| StataNow MP并行版19.5 | StataCorp | -- | |
| GraphPad Prism 9版 | GraphPad Software | -- | |
| BioRender | BioRender.com | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 患者入组与分层 | 血小板计数10-90×10⁹/L（两次连续测量）、Child-Pugh A/B/C分层、细菌感染诊断标准、排除标准（2周内抗血小板/抗凝、42天内大出血、肝外恶性肿瘤、长期抗生素、超出Milan标准的HCC） 阅读提示：Methods 2.1 Participants and Study Setting |
| T-TAS HD-CHIP测量 | 微通道尺寸0.3 mm×50 μm、猪源I型胶原和兔源组织因子涂层、剪切率1200 s⁻¹、氯化钙复钙、玉米胰蛋白酶抑制剂、OST阈值10 kPa、OT阈值60 kPa、AUC计算、重复测量两次 阅读提示：Methods 2.2 Total Thrombus Analysis System (T-TAS) and Additional Hemostatic Analyses |
| ROTEM检测 | ROTEM Delta系统、EXTEM或INTEM试剂盒、CT/CFT/MCF参数、柠檬酸盐全血 阅读提示：Methods 2.2 Total Thrombus Analysis System (T-TAS) and Additional Hemostatic Analyses |
| 统计分析与样本量 | 每组至少20例、alpha误差0.05、beta误差0.2、重复测量Spearman相关、ICCa和ICCc、Bland-Altman图、Jonckheere-Terpstra检验、单因素和多因素线性回归、分段回归节点30和50×10⁹/L、p<0.05 阅读提示：Methods 2.3 Statistical Analysis; Table S1; Figure S1 |
| 附加止血和炎症标志物检测 | VWF:Ag、VWF:RCo、FVIII、蛋白C、纤维蛋白原、LBP、sCD40L、P-选择素检测方法及试剂来源：文中未明确说明 阅读提示：Methods 2.2; Table 3 |