检测MASLD中组蛋白乙酰化水平与p300活性
确定MASLD患者和小鼠模型中组蛋白乙酰化修饰的变化及p300活性。
通过Western blot检测H3K27ac、H3K18ac和H3K9ac在OA处理的HepG2/AML.12细胞、多种饮食诱导的MASLD小鼠肝脏和MASLD患者肝组织中的水平，并使用p300 HAT活性试剂盒检测p300活性。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
抑制p300/CBP乙酰化活性通过下调ACSL4改善肝脂肪变性
Inhibition of Acetylation Activity of p300/CBP Ameliorates Hepatic Steatosis Through Downregulation of ACSL4
实验完整度
高包含患者样本、体外细胞模型、多种小鼠模型（HFD、CDAHFD、MCD、HFF）、转录组分析及机制验证（ChIP、基因敲除/过表达），具备多重证据。
主要模型
MASLD患者肝脏样本 HepG2和AML.12细胞（油酸诱导脂肪变性） HFD、CDAHFD、MCD、HFF饮食诱导的C57BL/6小鼠MASLD模型 Acsl4肝特异性敲除和AAV介导过表达小鼠
重点核对
B029-2给药剂量：2.5 mg/kg，腹腔注射，隔天一次 CDAHFD模型：8周龄雄性C57BL/6小鼠，CDAHFD饮食1周后，B029-2或DMSO处理1周 OA诱导模型：HepG2和AML.12细胞用油酸孵育24小时，B029-2处理48小时 ACSL4过表达：AAV8-TBG-Acsl4（5×10^10 Vg）尾静脉注射，CDAHFD饮食前2周
摘要
背景与目的：代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MASLD）是最常见的慢性肝病，目前缺乏理想的药物治疗。正在进行的研究表明组蛋白乙酰化参与MASLD的进展。本研究探讨了MASLD组织中特定组蛋白乙酰化位点的变化，以及B029-2（一种靶向p300/CBP乙酰化活性的小分子抑制剂）在进展性脂肪肝小鼠模型中的作用。方法：评估了MASLD患者和小鼠肝脏样本中H3K27/H3K18/H3K9的乙酰化水平。在MASLD模型中评估了B029-2的作用。进行ChIP实验以研究ACSL4的表观遗传调控机制。构建了肝脏特异性Acsl4敲除和过表达小鼠以验证ACSL4在MASLD中的作用。结果：我们观察到MASLD中p300 HAT活性以及p300/CBP诱导的H3K18ac和H3K27ac水平显著增加，而B029-2在体外和体内均显著减少肝脂肪变性。转录组分析显示，B029-2抑制了甘油三酯生物合成过程和长链脂肪酰基辅酶A生物合成过程中基因的表达。ChIP实验显示H3K18ac、H3K27ac和p300与ACSL4的启动子区域结合，而B029-2处理降低了它们的结合。AAV介导的肝脏特异性Acsl4过表达减弱了B029-2对小鼠MASLD的作用，而肝脏特异性Acsl4缺陷则阻断了B029-2的作用。结论：p300/CBP介导的H3K18ac和H3K27ac调节MASLD中依赖于ACSL4的脂质生物合成，可能成为治疗MASLD的潜在靶点。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- p300/CBP乙酰化活性在MASLD中的作用及小分子抑制剂B029-2的潜在治疗价值。
- 核心机制
- p300/CBP介导H3K18ac和H3K27ac，调控ACSL4依赖的脂质生物合成，B029-2通过抑制p300/CBP活性降低ACSL4转录，减少肝脂质积累。
- 主要证据
- 体外OA诱导细胞和多种MASLD小鼠模型中，B029-2降低H3K18ac/H3K27ac水平并改善脂肪变性；ChIP显示H3K18ac/H3K27ac和p300结合于ACSL4启动子，B029-2减少结合；Acsl4敲除阻断B029-2作用，过表达减弱其效应。
- 研究意义
- p300/CBP可能是MASLD的潜在治疗靶点，B029-2有望用于MASLD治疗，但需更多研究。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估B029-2对体外肝细胞脂肪变性的影响
探究p300/CBP抑制剂B029-2是否能减轻油酸诱导的肝细胞脂质积累。
HepG2和AML.12细胞用油酸(OA)处理以诱导脂肪变性，随后给予不同浓度B029-2，通过Oil Red O染色评估脂质积累，并用RT-PCR检测脂质代谢相关基因的表达。
评估B029-2对小鼠MASLD的治疗作用
验证B029-2在体内MASLD模型中的疗效。
CDAHFD饮食诱导的MASLD小鼠腹腔注射B029-2（2.5 mg/kg）或DMSO，观察肝重比、肝脏组织学、血清生化指标等变化；并在MCD和HFF模型中验证。
转录组分析鉴定B029-2调控的基因
揭示B029-2影响肝脂质代谢的分子机制。
基于本课题组前期B029-2处理的Huh-7细胞ATAC-seq和RNA-seq数据集，进行GO分析，鉴定与脂质代谢相关的下调基因。
验证p300/CBP对ACSL4的表观遗传调控
证实B029-2通过p300/CBP介导的组蛋白乙酰化调控ACSL4转录。
通过ChIP检测p300和H3K18ac/H3K27ac在ACSL4启动子区域的富集，及B029-2处理对富集的影响；并检测ACSL4的表达水平。
验证ACSL4在B029-2治疗中的功能必要性
确定B029-2对MASLD的改善作用是否部分通过抑制ACSL4表达。
利用Acsl4肝特异性敲除(LKO)和AAV介导的肝特异性过表达小鼠，在CDAHFD模型中观察B029-2的作用是否被阻断或减弱。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | DMEM培养基 | Pricella | -- |
| 胎牛血清 | Gibco | -- | |
| 基因转染 | Lipofectamine 2000转染试剂 | Invitrogen | -- |
| RNA提取 | TRIzol试剂 | Takara | -- |
| Western blot | 抗H3K27ac抗体 | Cell Signalling Technology | #8173T |
| 抗H3K18ac抗体 | Cell Signalling Technology | #13998T | |
| 抗H3K9ac抗体 | Cell Signalling Technology | #9649T | |
| 抗H3抗体 | Cell Signalling Technology | #4499S | |
| 抗IgG抗体 | Cell Signalling Technology | #3900S | |
| 抗p300抗体 | Cell Signalling Technology | #54062S | |
| 抗GAPDH抗体 | Cell Signalling Technology | #2118T | |
| 抗FACL4抗体 | Abcam | ab155282 | |
| 免疫组化 | 抗F4/80抗体 | Servicebio | GB11027 |
| Western blot | 抗β-肌动蛋白抗体 | Proteintech | 66009-1-Ig |
| 蛋白提取 | 蛋白酶抑制剂 | Roche | -- |
| Western blot | 硝酸纤维素膜 | Millipore | HAHY00010 |
| 生化检测 | 甘油三酯检测试剂盒 | mlbio | ml076637 |
| 总胆固醇检测试剂盒 | mlbio | ml076634 | |
| 组织学 | 天狼星红染色试剂盒 | Sbibio Life Sciences | BP-DL029 |
| 免疫组化 | EnVision检测试剂盒 | GeneTech | GK500710 |
| Western blot成像 | Odyssey红外成像系统 | LI-COR | -- |
| 血糖测量 | ACCU-CHEK血糖仪 | Roche | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 饮食诱导MASLD模型 | 小鼠品系、周龄、性别、饮食种类、诱导时间 阅读提示：Methods 2.2 Animal Studies和Figure 3A |
| B029-2处理 | 给药剂量、途径、频率、持续时间 阅读提示：Methods 2.2 Animal Studies和Figure 3A |
| 细胞模型 | 细胞系、OA浓度与处理时间、B029-2浓度与处理时间 阅读提示：Methods 2.5 和 2.11 |
| ChIP实验 | 抗体（H3K27ac、H3K18ac、H3K9ac、p300）、细胞类型、处理条件、引物序列 阅读提示：Methods 2.14 Chromatin Immunoprecipitation Assay |
| 基因敲除/过表达 | 小鼠品系（Acsl4f/f和Acsl4LKO）、AAV注射剂量和时间 阅读提示：Methods 2.2 和 2.3 |