酪氨酸激酶抑制剂诱导的自噬促进免疫原性细胞死亡协同构建肝细胞癌免疫治疗微环境

背景：酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）如仑伐替尼与免疫检查点抑制剂（ICIs）的联合治疗已成为晚期肝细胞癌（HCC）一线治疗的基石。然而，这种方法面临显著瓶颈，客观缓解率徘徊在20–36%左右，主要原因是大多数HCC肿瘤的非免疫原性（“冷”）特性。这凸显了对能够重塑肿瘤免疫微环境以增强治疗效果策略的关键需求。方法：我们系统筛选了现有TKIs诱导免疫原性细胞死亡（ICD）的能力。通过多种检测方法在HCC细胞系和来源于20例原发性和15例新辅助治疗HCC样本的患者来源类器官肿瘤球体（PDOTS）中验证了ICD标志物。机制研究采用了RNA-seq、药理学抑制剂和基因敲低方法。建立了肿瘤细胞-骨髓源性树突状细胞（BMDC）-CD8+ T细胞三重共培养系统用于功能检测。在皮下和原位小鼠模型中评估了体内疗效。使用飞行时间质谱流式细胞术（CyTOF）、多重免疫荧光和空间邻近性分析进行肿瘤免疫谱分析。结果：在筛选的TKIs中，安罗替尼被确定为最有效的ICD诱导剂，触发细胞外ATP释放、HMGB1分泌和表面钙网蛋白暴露。RNA-seq和GSEA将ER应激和自噬确定为富集最高的通路。机制上，安罗替尼抑制FGFR-1磷酸化，激活ER应激（CHOP/ATF4上调和ATF4核转位）和继发性自噬（LC3-II转化）。ER应激或自噬的药理学抑制，以及ATG5/LC3B敲低，消除了损伤相关分子模式（DAMPs）的释放，证实了自噬在ICD执行中的关键作用。Luminex细胞因子检测和质谱鉴定出对树突状细胞募集至关重要的关键分泌组（CCL19、CXCL12）和DAMPs。在BMDC共培养实验中，安罗替尼条件培养基增强了DC迁移（被抗HMGB1阻断）、DC激活（CD86/CD40上调）以及随后的CD8+ T细胞启动（CD25/CD69/IFN-γ表达）。在体内，安罗替尼抑制肿瘤生长，增强CD8+ T细胞和树突状细胞浸润，并增加ICD+肿瘤细胞与T细胞之间的空间相互作用。安罗替尼与抗PD-1疗法协同作用，该效应由CD8+ T细胞和DCs介导。遗传（shATG5）或药理学（3-MA）自噬抑制显著减弱了安罗替尼的抗肿瘤效果，而通过ATG5过表达或二甲双胍增强自噬则增强了其效果。安罗替尼、抗PD-1和二甲双胍的三联组合达到了最高的HMGB1释放、免疫细胞浸润和最大的肿瘤抑制效果。结论：本研究开创性地将安罗替尼确定为HCC中一种依赖ER应激和自噬的ICD诱导剂。我们全面的机制解析和可靠的临床前证据确立了安罗替尼通过FGFR-1/ER应激/自噬/DAMP释放轴将免疫学“冷”肿瘤转化为“热”肿瘤的能力。与抗PD-1的协同作用以及二甲双胍的增强作用为克服当前靶向-免疫治疗局限性的新型联合策略提供了依据，为改善晚期HCC的缓解率提供了一种有前景的方法。